在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散（將組織塊制備成單個(gè)細(xì)胞懸液）以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中,，貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶 (Trypsin) ,，EDTA 等,。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段,，水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì),，破壞細(xì)胞間的連接，從而使組織或貼壁細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞,。胰酶分散細(xì)胞的活性與組織或細(xì)胞的特性,、胰酶濃度,、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在PH 8.0和37℃時(shí),，胰酶的作用能力**強(qiáng),，因此使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度,、溫度和時(shí)間,，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷。一般常用胰酶的工作濃度為0.25%,，而半貼壁細(xì)胞或?qū)σ让该舾械募?xì)胞常采用低濃度（0.05%）的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化,。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+，從而破壞細(xì)胞連接促進(jìn)細(xì)胞的解離,，因此在胰酶溶液中常常會(huì)加入一定量的EDTA混合使用,，以增強(qiáng)解離效果。胰酶用0.05%還是0.25%的,？需不需要含酚紅的,？江西重組胰酶生產(chǎn)企業(yè)

    EDTA-胰蛋白酶的配制1、胰酶是,，就是說(shuō),，盡量不要用水來(lái)溶，因?yàn)橐３譂B透壓,。2,、EDTA的工作液溶度是－，根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度自己調(diào)整,。EDTA并不是必須的,，容易消化的細(xì)胞可不加。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響,，因此使用時(shí)要甚重,。如果影響貼壁，但消化時(shí)必須要用,，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后,，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng),，可去除EDTA,。如果對(duì)貼壁沒(méi)影響，那么可不離心,。3,、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4,、注意,，血清可終止胰酶的作用，但不能終止EDTA的作用,，對(duì)有些細(xì)胞來(lái)說(shuō),，終止消化后的離心是必要的。5,、胰酶和EDTA在pH為8左右的時(shí)候**易溶解,，在配制時(shí)可先滴幾滴NaOH將pH調(diào)至8，注意,，胰酶可使溶液變酸,，所以要邊溶邊測(cè)pH，隨時(shí)調(diào)整,。注意，不可加過(guò)量NaOH,，否則過(guò)堿,，細(xì)胞會(huì)受不了。6,、胰酶EDTA相對(duì)比較難溶,，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過(guò)夜,，待溶解后過(guò)濾除菌,。7、可配2－3乘的胰酶,，這樣比較節(jié)約時(shí)間和濾器,，用的時(shí)候?qū)ι蠝缇鶳BS即可。8,、儲(chǔ)存液放在－20度冰箱凍存,，使用液放在4度，用的時(shí)候不要放在27度水浴鍋溫浴,，因?yàn)檫@樣會(huì)讓胰酶很快失效,，使用前放在室溫下一會(huì)，因?yàn)榧拥牧亢苌?，所以一般不?huì)凍壞細(xì)胞,。9、消化時(shí),。 山東國(guó)產(chǎn)胰酶市場(chǎng)報(bào)價(jià)胰酶在PH值7.2-8.0的時(shí)候,，溶液呈淡紅色。

淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎？能,，對(duì)于胰酶呈黃色的問(wèn)題,，不同品牌也都對(duì)此現(xiàn)象進(jìn)行了測(cè)試實(shí)驗(yàn)。變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離,，請(qǐng)放心使用,。細(xì)胞消化時(shí)，胰酶不去除對(duì)細(xì)胞的影響,？細(xì)胞消化時(shí),，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA,，不去除是沒(méi)有問(wèn)題的,。如果消化液中含有胰酶和EDTA，比較好去除,。EDTA是一種化學(xué)螯合劑,，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子,，使細(xì)胞分離,。但EDTA不能被血清中和，消化后要徹底清洗去除,，否則細(xì)胞易脫壁,。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率，所以常二者合用,。胰酶的保存

    (不含EDTA含酚紅)性質(zhì),、用途與生產(chǎn)工藝背景胰酶又名胰醇素、胰液素,。白色或淡黃色無(wú)定形粉末,。系從各種動(dòng)物胰臟制取的混合物，主要是蛋白酶,、脂酶,、淀粉酶。溶于水呈微渾溶液,。不溶于醇,、醚。有引濕性,，遇酸,、堿及熱即喪失活力，水溶液遇酸,、熱,、重金屬或單寧酸時(shí)產(chǎn)生沉淀。為助消化藥，用于缺乏胰液的***癥,。也用于皮革工業(yè)和紡織印染,，主要用于酶法脫毛。將絞碎的豬胰漿經(jīng)***,、提取,、沉淀、脫脂,、干燥,、粉碎而得。簡(jiǎn)介(不含EDTA含酚紅)為細(xì)胞培養(yǎng)基,，1.不含EDTA含酚紅：含酚紅,，（1：250）溶于HBSS溶液，不含鈣鎂,。-20℃保存,。胰(不含EDTA含酚紅)含，不含EDTA和酚紅,，溶于無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液中,，經(jīng)過(guò)濾除菌，可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞和組織的消化,，通常室溫消化2分鐘左右就消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。使用方法(不含EDTA含酚紅)使用說(shuō)明---貼壁細(xì)胞Chemicalbook的消化：a)吸去培養(yǎng)液,，用無(wú)菌的PBS,、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清,。b)加入少量胰蛋白酶消化液,，蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置1-2分鐘,。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同,，對(duì)于貼壁牢固的細(xì)胞可適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間。c)顯微鏡下觀察,，細(xì)胞明顯收縮,，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化。 消化液經(jīng)過(guò)過(guò)濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化,。

0.25%胰酶是細(xì)胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑,，下面匯總一下胰酶使用過(guò)程中常見(jiàn)的一些問(wèn)題。

胰酶的使用濃度是多少,？胰酶濃度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液,。

胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時(shí)間延長(zhǎng)，胰酶的消化能力減弱,。胰酶可分裝凍存,，在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長(zhǎng)期保存,。胰酶使用的時(shí)候要注意什么,？（1）在使用胰酶細(xì)胞消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。（2）胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),，否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差,。 胰蛋白酶可以用于原代細(xì)胞的傳代過(guò)程中分散組織。云南EDTA胰酶價(jià)格對(duì)比

消化液經(jīng)過(guò)過(guò)濾除菌,，可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,，或者一些組織的消化。江西重組胰酶生產(chǎn)企業(yè)

0.25%胰酶和加了EDTA胰酶區(qū)別是什么詳細(xì)說(shuō)明

細(xì)胞之間是通過(guò)CAM（細(xì)胞粘性分子）相連的,，而很多粘性分子只有在有+2價(jià)金屬離子,，如Ca2+,Mg2+，的存在下才能行使這種功能,。EDTA是鈣離子的鰲合劑,，在胰酶中加入EDTA的作用簡(jiǎn)單的說(shuō)就是為了增加胰酶的消化作用，尤其適用于比較難于消化的細(xì)胞,；同時(shí)可以減少胰消化時(shí)間,，以減少酶對(duì)細(xì)胞的損傷作用。加入EDTA的消化反應(yīng)不能通過(guò)加入培養(yǎng)液終止,，必須離心才能去除EDTA,，所以要掌握好消化時(shí)間。 江西重組胰酶生產(chǎn)企業(yè)