0.25%胰酶是細(xì)胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑,，下面匯總一下胰酶使用過程中常見的一些問題。胰酶的使用濃度是多少,？胰酶濃度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液,。為什么收到的胰酶會(huì)有顏色差異,？商品化胰酶溶液需要用干冰運(yùn)輸，在運(yùn)輸過程中,，胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會(huì)極少部分的氣體交換,，導(dǎo)致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑,，因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的,。由干冰運(yùn)輸過程中導(dǎo)致的PH值的變化很小，PH值會(huì)從7.2-8.0變化到了6.8左右,，在PH值7.2-8.0的時(shí)候,，溶液呈淡紅色；PH值6.8左右時(shí)呈淡黃色,。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起,，歸因于使用干冰運(yùn)輸。這種顏色的變化是行業(yè)普遍現(xiàn)象,，在不同供應(yīng)商的胰酶產(chǎn)品都會(huì)出現(xiàn),。消化液經(jīng)過過濾除菌，可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,，或者一些組織的消化,。青海胰酶聯(lián)系方式

胰蛋白酶是一種肽鏈內(nèi)切酶，屬于絲氨酸蛋白酶家族,，不僅可以水解堿性氨基酸（精氨酸或賴氨酸）羧基端的肽鍵,，還可以水解由堿性氨基酸的羧基形成的酰胺鍵或酯鍵。胰蛋白酶可以從牛,、豬等哺乳動(dòng)物的胰臟提取,，經(jīng)過純化后獲得結(jié)晶，再制成凍干制劑,。牛的胰蛋白酶有223個(gè)氨基酸,，分子量為23800道爾頓，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶,。胰蛋白酶溶于水,，不溶于乙醇、甘油和三氯甲烷等有機(jī)溶劑,。胰蛋白酶的等電點(diǎn)pH值為10.1,，**適pH值范圍在7.8~8.5左右，pH值大于9.0時(shí)不可逆失活,。鈣離子對(duì)胰蛋白酶的酶活具有保護(hù)和***作用。[1]內(nèi)蒙古胰酶牌子在使用胰酶細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染,。

胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產(chǎn)生沒有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后,，小腸內(nèi)的腸肽酶會(huì)活化該酶原,，形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點(diǎn)在于已經(jīng)活化的胰蛋白酶,，能夠繼續(xù)活化更多胰蛋白酶原,，這種過程即自動(dòng)催化。胰蛋白酶在小腸工作,，它會(huì)將蛋白質(zhì)水解為肽進(jìn)而分解為氨基酸,，其**適溫度約為 37°℃。Trypsin solution(2.5%)由 2.5%胰酶組成,，不含 EDTA,，經(jīng)過濾除菌。本試劑可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,，或者一些組織的消化,，通常室溫下 1min 左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。該溶液濃度較高,，可以稀釋到相應(yīng)濃度后使用,。

胰酶中的酚紅有哪些作用？酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH指示劑,，中性時(shí)為紅色,，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色,。研究表明：酚紅可以模擬固醇類***（特別是雌***）的作用,。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細(xì)胞尤其是哺乳類細(xì)胞時(shí),，建議用不含酚紅的培養(yǎng)基,。由于酚紅干擾檢測，在做流式細(xì)胞檢測時(shí),，也會(huì)使用不含酚紅的培養(yǎng)基或者胰酶,。圖 2. Phenol red test圖片來源網(wǎng)絡(luò)8、在做細(xì)胞凋亡檢測時(shí),，細(xì)胞為什么不能用含有EDTA的胰酶消化,？Annexin V（膜聯(lián)蛋白）是Ca2+依賴的蛋白，EDTA會(huì)螯合Ca2+從而影響Annexin V,，進(jìn)而影響結(jié)果,，因此需選用不含EDTA的胰酶。建議放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行消化,，時(shí)間可以長一點(diǎn),。隨時(shí)觀察細(xì)胞情況，避免消化過度；也可使用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞刮下,，后用***吹勻,，比消化簡單，還可避免使用胰酶帶來的傷害,。胰蛋白酶溶液作為細(xì)胞分離試劑廣泛應(yīng)用于貼壁細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng),。

    EDTA-胰蛋白酶的配制1、胰酶是,，就是說,，盡量不要用水來溶，因?yàn)橐３譂B透壓,。2,、EDTA的工作液溶度是－，根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度自己調(diào)整,。EDTA并不是必須的,，容易消化的細(xì)胞可不加。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響,，因此使用時(shí)要甚重,。如果影響貼壁，但消化時(shí)必須要用,，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后,，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng),，可去除EDTA,。如果對(duì)貼壁沒影響，那么可不離心,。3,、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS,。4,、注意，血清可終止胰酶的作用,，但不能終止EDTA的作用,，對(duì)有些細(xì)胞來說，終止消化后的離心是必要的,。5,、胰酶和EDTA在pH為8左右的時(shí)候**易溶解，在配制時(shí)可先滴幾滴NaOH將pH調(diào)至8,，注意,，胰酶可使溶液變酸，所以要邊溶邊測pH，隨時(shí)調(diào)整,。注意,，不可加過量NaOH，否則過堿,，細(xì)胞會(huì)受不了。6,、胰酶EDTA相對(duì)比較難溶,，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過夜,，待溶解后過濾除菌,。7、可配2－3乘的胰酶,，這樣比較節(jié)約時(shí)間和濾器,，用的時(shí)候?qū)ι蠝缇鶳BS即可。8,、儲(chǔ)存液放在－20度冰箱凍存,，使用液放在4度，用的時(shí)候不要放在27度水浴鍋溫浴,，因?yàn)檫@樣會(huì)讓胰酶很快失效,，使用前放在室溫下一會(huì)，因?yàn)榧拥牧亢苌?，所以一般不?huì)凍壞細(xì)胞,。9、消化時(shí),。 胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起,，歸因于使用干冰運(yùn)輸。青海胰酶聯(lián)系方式

EDTA是一種化學(xué)螯合劑,，主要作用在于能螯合Ca,、Mg離子，使細(xì)胞分離,。青海胰酶聯(lián)系方式

胰酶分裝凍存時(shí)要注意什么,？胰酶分裝時(shí)盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則,。因?yàn)槔鋬霰４鏁r(shí)體積會(huì)膨脹,，多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會(huì)降低消化效果并增大污染的可能性。5,、怎么才能判斷胰酶消化完全,？注意：不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才表示消化好了。一般肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動(dòng)了,，多半呈沙狀移動(dòng)就可以了,，就應(yīng)該停止消化。6,、胰酶適用于哪些細(xì)胞消化,？它的消化效果與哪些有關(guān)呢？胰酶適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細(xì)胞,，如胚胎,、上皮、肝,、腎等組織,，但對(duì)纖維性組織和較硬的*組織效果較差。胰酶的消化效果主要與pH值,、溫度,、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān),。青海胰酶聯(lián)系方式