EDTA-胰蛋白酶的配制1、胰酶是,，就是說(shuō),，盡量不要用水來(lái)溶，因?yàn)橐３譂B透壓,。2,、EDTA的工作液溶度是－，根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度自己調(diào)整,。EDTA并不是必須的,，容易消化的細(xì)胞可不加。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響,，因此使用時(shí)要甚重,。如果影響貼壁，但消化時(shí)必須要用,，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后,，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng),，可去除EDTA,。如果對(duì)貼壁沒(méi)影響，那么可不離心,。3、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比,。和胰酶一起溶于PBS,。4、注意,，血清可終止胰酶的作用,，但不能終止EDTA的作用，對(duì)有些細(xì)胞來(lái)說(shuō),，終止消化后的離心是必要的,。5,、胰酶和EDTA在pH為8左右的時(shí)候**易溶解，在配制時(shí)可先滴幾滴NaOH將pH調(diào)至8,，注意,，胰酶可使溶液變酸，所以要邊溶邊測(cè)pH,，隨時(shí)調(diào)整,。注意，不可加過(guò)量NaOH,，否則過(guò)堿,，細(xì)胞會(huì)受不了。6,、胰酶EDTA相對(duì)比較難溶,，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過(guò)夜,，待溶解后過(guò)濾除菌,。7、可配2－3乘的胰酶,，這樣比較節(jié)約時(shí)間和濾器,，用的時(shí)候?qū)ι蠝缇鶳BS即可。8,、儲(chǔ)存液放在－20度冰箱凍存,，使用液放在4度，用的時(shí)候不要放在27度水浴鍋溫浴,，因?yàn)檫@樣會(huì)讓胰酶很快失效,，使用前放在室溫下一會(huì)，因?yàn)榧拥牧亢苌?，所以一般不?huì)凍壞細(xì)胞,。9、消化時(shí),。 適用于貼壁細(xì)胞的消化傳代,；也可用于組織細(xì)胞分離的初步消化。浙江胰酶常見(jiàn)問(wèn)題

胰酶消化細(xì)胞的原理胰酶消化細(xì)胞是一種用來(lái)分解細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞間物質(zhì)的化學(xué)過(guò)程它可以被看成一種簡(jiǎn)單的動(dòng)力學(xué)過(guò)程,，它將細(xì)胞結(jié)合部分的物質(zhì)分解為其他物質(zhì),，然后這些留下的物質(zhì)可以用來(lái)維持細(xì)胞的高能量水平這種過(guò)程通過(guò)將脂肪、蛋白質(zhì),、糖類(lèi)和其它物質(zhì)分解為小的離子或者原子小分子的方式來(lái)發(fā)生,。胰酶是細(xì)胞分解與吸收物質(zhì)的一種關(guān)鍵分子，通常有四種類(lèi)型,，它們是肽酶,，脂水解酶,，載脂蛋白酶和糖水解酶，分別可以將蛋白質(zhì),、脂肪,、脂蛋白和糖類(lèi)物質(zhì)分解為更小的離子和分子，以便細(xì)胞可以更好地吸收物質(zhì),，維持其自身的正常功能和形態(tài),。海南胰酶哪家好0.25%胰酶細(xì)胞消化液(含有EDTA，含酚紅)消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),。

常用的消化酶有:胰酶：用得**多的是胰酶,。一般濃度在0.25-0.5%。作用時(shí)間根據(jù)干細(xì)胞種類(lèi),、作用溫度等因素而變化很大,，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的干細(xì)胞,，在37度條件下,，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清,。主要作用于干細(xì)胞間,。配制時(shí)不能用含鈣、鎂的平衡液,，否則影響活性,。保存于-20度。膠原酶：膠原酶是比較少用的,，一般是用原代培養(yǎng)時(shí),，從組織消化下干細(xì)胞。這種方法作用溫和,，對(duì)干細(xì)胞損傷較小,，但是，價(jià)格也較貴,。中止同樣是用血清,。胰酶的質(zhì)量是影響干細(xì)胞的消化的關(guān)鍵因素之一，如果配的比較標(biāo)準(zhǔn),，消化的時(shí)候就容易消化,，反之就不易消化。還要在你看到消化過(guò)頭的情況下,，如果干細(xì)胞下來(lái)的比較多了,，這時(shí)可以連同cmf或pbs加上營(yíng)養(yǎng)液一起傳,。營(yíng)養(yǎng)液中有血清,，胰酶遇到血清就會(huì)自動(dòng)終止消化,，但這樣操作對(duì)干細(xì)胞是有一定的影響的。對(duì)于容易消化的干細(xì)胞,，加入pbs緩沖液洗去血清或加入胰酶,，先中和血清的作用（30s），棄之,，再加入適量胰酶作用10s-40s（根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度）,，棄之，這樣依賴殘余的胰酶就可將干細(xì)胞消化單細(xì)胞,。

    在組織細(xì)胞的體外培養(yǎng)和原代細(xì)胞培養(yǎng)中的組織細(xì)胞分散（將組織塊制備成單個(gè)細(xì)胞懸液）以及傳代細(xì)胞培養(yǎng)中,，貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞的消化分散均要使用組織細(xì)胞消化液。常用的消化液為胰蛋白酶(Trypsin),，EDTA等,。胰蛋白酶是一種絲氨酸水解酶，它能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)切段,，水解細(xì)胞間的蛋白質(zhì),，破壞細(xì)胞間的連接，從而使組織或貼壁細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞,。胰酶分散細(xì)胞的活性與組織或細(xì)胞的特性,、胰酶濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān),，在℃時(shí),，胰酶的作用能力**強(qiáng)，因此使用胰酶時(shí),，應(yīng)把握好濃度,、溫度和時(shí)間，以免消化過(guò)度造成細(xì)胞損傷,。一般常用胰酶的工作濃度為,，而半貼壁細(xì)胞或?qū)σ让该舾械募?xì)胞常采用低濃度（）的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化。由于EDTA能夠螯合Ca2+和Mg2+,，從而破壞細(xì)胞連接促進(jìn)細(xì)胞的解離,，因此在胰酶溶液中常常會(huì)加入一定量的EDTA混合使用，以增強(qiáng)解離效果,。但是對(duì)于EDTA可能會(huì)干擾后續(xù)的測(cè)試分析時(shí),，推薦選擇不含EDTA的消化液。本產(chǎn)品含有(Trypsin),，溶于無(wú)鈣鎂平衡鹽溶液中,，經(jīng)過(guò)濾除菌，可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞和組織的消化,。為改良型,，除了具有方便快速,、穩(wěn)定安全、細(xì)胞狀態(tài)好等特點(diǎn)之外,，消化時(shí)間更短,，消化效果媲美進(jìn)口產(chǎn)品，特別適用于難消化的細(xì)胞,。 有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑,。

胰酶和雙抗怎么保存？

胰酶和雙抗怎么保存,？

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雙抗的保存:雙抗通常情況下在-20°C保存一年。由于該試劑在4°C下長(zhǎng)期存放是不穩(wěn)定的,，分裝后在-20°C下避光保存,。青霉素在2-8°C存放時(shí)間不應(yīng)超過(guò)4天，鏈霉素相對(duì)穩(wěn)定一點(diǎn),，在2-8°C可以存放30天左右,。雙抗從凍融后基本成分已開(kāi)始降解。胰酶的保存：胰酶可在-20°C下保存一年,。隨著時(shí)間延長(zhǎng),，胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存,，在使用前從-20°C冰箱取出,。盡量避免在4C長(zhǎng)期保存。 含EDTA的胰酶消化活力會(huì)比不含EDTA的強(qiáng),。西藏進(jìn)口胰酶牌子

胰蛋白酶是一種胰絲氨酸肽鏈內(nèi)切酶,，作用于多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基側(cè)。浙江胰酶常見(jiàn)問(wèn)題

    胰蛋白酶用法用量1.每次～5mg,，用蒸餾水5～10ml溶解,。2.一般應(yīng)用：1次5000單位，每日1次肌注,，用量酌情而定,。為防止疼痛，可加適量普魯卡因,。局部用*視情而定,，可配成溶液制劑（～，微堿性時(shí)活性**強(qiáng)）,、噴霧劑,、粉劑、油膏等，用作體腔內(nèi)注射,、患部注射,、噴霧、濕敷,、涂搽等。3.治蛇毒：取注射用結(jié)晶胰蛋白酶2000單位1～3支,，加～（或注射用水）4～20ml稀釋?zhuān)匝篮蹫橹行?，在傷口周?chē)鹘?rùn)注射，或在腫脹部位上方作環(huán)狀封閉1～2次,。如病情需要可重復(fù)使用,。若傷肢腫脹明顯，可于注射本品30分鐘后,，切開(kāi)傷口排毒減壓（嚴(yán)重出血者例外）,，也可在腫脹部位針刺排毒。如傷口已壞死,、潰爛,，可用其***胰蛋白酶注意事項(xiàng)1.不可作靜注。用前需作劃痕試驗(yàn),，應(yīng)注意可能產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng),。2.吸取注射液后應(yīng)另?yè)Q針頭，以免注射時(shí)疼痛,。3.外用時(shí),，可采用注射用制劑以緩沖液溶解，但必須在3小時(shí)內(nèi)用畢,。胰蛋白酶不良反應(yīng)：1．注射局部疼痛,、硬結(jié)。2．本品可引起組胺釋放,，產(chǎn)生全身反應(yīng),，有寒戰(zhàn)、發(fā)熱,、***,、頭暈、胸痛,、***,、皮疹、血管神經(jīng)性水腫,、呼吸困難,、眼壓升高、白細(xì)胞減少等。癥狀輕時(shí)不影響繼續(xù)***,，給予抗組胺*和對(duì)癥*物即可控制,，嚴(yán)重時(shí)應(yīng)即停*。3．本品偶可致過(guò)敏性休克,。浙江胰酶常見(jiàn)問(wèn)題