從而使培養(yǎng)基的預(yù)熱、加熱**及冷卻過(guò)程可在同一設(shè)備內(nèi)完成,。該流程的加熱和冷卻時(shí)間比噴射加熱連續(xù)**流程要長(zhǎng)些，但由于在培養(yǎng)基的預(yù)熱過(guò)程同時(shí)也起到了**后培養(yǎng)基的冷卻,，因而節(jié)約了蒸汽和冷卻水的用量。（2）蒸汽直接噴射型的連續(xù)**系統(tǒng)流程中采用了蒸汽噴射器,，它使培養(yǎng)液與高溫蒸汽直接接觸,，從而在短時(shí)間內(nèi)可將培養(yǎng)液急速升溫至預(yù)定的**溫度然后在該溫度下維持一段時(shí)間**，**后的培養(yǎng)基通過(guò)一膨脹閥進(jìn)入真空冷卻器急速冷卻,，從圖中可以看出,，由于該流程中培養(yǎng)基受熱時(shí)間短,，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的損失也就不很?chē)?yán)重,，同時(shí)該流程保證了培養(yǎng)基物料**先出，避免了過(guò)熱或**不徹底等現(xiàn)象,。（3）由連消塔,、維持罐和噴淋冷卻組成的**系統(tǒng)連續(xù)**的基本設(shè)備一般包括：①配料預(yù)熱罐，將配制好的料液預(yù)熱到60-70℃,，以避免連續(xù)**時(shí)由于料液與蒸汽溫度過(guò)大而產(chǎn)生水汽撞擊聲,；②連消塔，連消塔的作用主要是使高溫蒸汽與料液迅速接觸混和,，并使料液的溫度很快升高到**溫度（126-132）℃,；③維持罐，連消塔加熱的時(shí)間很短,，光靠這段時(shí)間的**是不夠的,，維持罐的作用是使料液在**溫度下保持5-7min，以達(dá)到**的目的,；④冷卻管，從維持罐出來(lái)的料液要經(jīng)過(guò)冷卻排管進(jìn)行冷卻,。無(wú)血清培養(yǎng)基適用于需要無(wú)血清環(huán)境的細(xì)胞,。海南基礎(chǔ)培養(yǎng)基價(jià)格信息

    按中華******典2005年版二部附錄ⅧL干燥失重測(cè)定法進(jìn)行。滲透壓溶劑通過(guò)半透膜由低濃度向高濃度溶液擴(kuò)散的現(xiàn)象稱(chēng)為滲透,，阻止?jié)B透所需施加的壓力,，稱(chēng)為滲透壓,。細(xì)胞必須生活在等滲環(huán)境中，動(dòng)物細(xì)胞借助K＋,、Na＋維持滲透平衡,。大多數(shù)細(xì)胞對(duì)滲透壓有一定的耐受性。但是培養(yǎng)液滲透壓過(guò)高容易使細(xì)胞脫水萎縮,，培養(yǎng)液滲透壓過(guò)低容易使細(xì)胞膨脹破裂,，因此要控制培養(yǎng)基的滲透壓范圍。按中華******典2005年版二部附錄ⅨG滲透壓摩爾濃度測(cè)定法進(jìn)行,。**內(nèi)*****內(nèi)***是許多病原性**所產(chǎn)生的***,。它的特殊性在于不是**或**的代謝產(chǎn)物，而是**死亡或解體后才釋放出來(lái)的一種具有生物活性的物質(zhì),。培養(yǎng)基**內(nèi)***過(guò)高,，對(duì)生物制品*苗（如狂犬、乙肝*苗）,、基因工程*品等注射用的*品都需要檢查**內(nèi)***,。因此本項(xiàng)目的檢驗(yàn)符合生物制品質(zhì)量控制要求。常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)基的**內(nèi)***標(biāo)準(zhǔn)定為＜10EU/ml,。稱(chēng)取本品規(guī)定量（見(jiàn)表4-12）的1/100,，加入**內(nèi)***檢查用水10mL溶解，吸取該溶液mL加**內(nèi)***檢查用水mL,，混勻即得試樣,。按中華******典2005年版二部附錄ⅪE**內(nèi)***檢查法中的凝膠法進(jìn)行。微生物限度細(xì)胞培養(yǎng)基不是無(wú)菌產(chǎn)品,，其中的微生物在一定條件下會(huì)吸收細(xì)胞培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)滋生繁殖,。海南基礎(chǔ)培養(yǎng)基價(jià)格信息無(wú)血清培養(yǎng)基有助于維持細(xì)胞的純凈生長(zhǎng)環(huán)境。

    體外動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)需要大量谷氨酰胺,，利用量常超過(guò)其他必須氨基酸利用量的總和,。維生素是維持細(xì)胞生長(zhǎng)的生物活性物質(zhì)，在細(xì)胞代謝中起調(diào)節(jié)及控制作用,。維生素可分為水溶性和脂溶性?xún)深?lèi),，水溶性維生素主要包括泛酸、維生素B12,、葉酸,、煙酰胺、吡哆醛,、硫胺素,、核黃素、維生素C,、膽堿,、肌醇等,；脂溶性維生素主要包括維生素A、D,、E,、K等；有的培養(yǎng)液中還直接采用ATP和輔酶A,；大部分培養(yǎng)基中還有生物素,。許多維生素參與構(gòu)成各種酶的活性基團(tuán)的成分，沒(méi)有它們,，酶便沒(méi)有活性,，代謝活動(dòng)將無(wú)法進(jìn)行。比如,，泛酸可以在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)變成?；d體蛋白和輔酶（如輔酶A），參與糖類(lèi),、脂類(lèi)和蛋白質(zhì)代謝中的催化反應(yīng),；維生素B12則在細(xì)胞內(nèi)參與葉酸的合成和脂肪酸的合成等。不同配方的細(xì)胞培養(yǎng)基中維生素的濃度有較大差異,。例如,，DMEM培養(yǎng)基中維生素的含量約為MEM培養(yǎng)基的兩倍，其原因是一方面不同種類(lèi)維生素的作用不同,，另一方面不同種類(lèi)的細(xì)胞對(duì)維生素的需求也可能有較大差異,，相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基的配方中維生素的含量也可能不同,。無(wú)機(jī)鹽是細(xì)胞維持生命活動(dòng)所不可缺少的營(yíng)養(yǎng)成分,，主要有Na+、K+,、Ca2+,、Mg2+、Cl－,、PO43—,、SO42—、HCO3－等,，主要作用為維持細(xì)胞培養(yǎng)液滲透壓平衡,。

    1.細(xì)胞培養(yǎng)基的種類(lèi)按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液,、天然細(xì)胞培養(yǎng)基,、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基,、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類(lèi),。（balancedsaltsolution,，BSS）BSS主要是由無(wú)機(jī)鹽、葡萄糖組成,，它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡,，保持pH穩(wěn)定及提供簡(jiǎn)單的營(yíng)養(yǎng)。其主要用于細(xì)胞的漂洗,、配制其他試劑等,。幾種常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank's與Hank's的一個(gè)主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+,，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液,。因?yàn)镃a2+、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成份,，參與細(xì)胞粘附等功能,，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細(xì)胞結(jié)團(tuán),。此外,，Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液，前者緩沖能力較弱,，適合于密閉培養(yǎng),；后者緩沖能力較強(qiáng)，適合于5%CO2的培養(yǎng)條件,。表1-1幾種常用的BSS配方（g/L）天然培養(yǎng)基指來(lái)自動(dòng)物體液或利用**分離提取的一類(lèi)培養(yǎng)基,，如血漿、血清,、***,、雞胚浸出液等。其***是營(yíng)養(yǎng)成分豐富,，培養(yǎng)效果良好,，但缺點(diǎn)是成分復(fù)雜，來(lái)源受限且制作過(guò)程復(fù)雜,、批間差異大,。目前***使用的天然培養(yǎng)基是血清，另外各種**提取液,、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類(lèi)物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少,。DMEM培養(yǎng)基提供了細(xì)胞生長(zhǎng)所需的基本營(yíng)養(yǎng)成分。

    已發(fā)現(xiàn)當(dāng)培養(yǎng)基中的血清濃度減少時(shí),，這些成分都是必需的,。既使在使用血清的情況下，這些成分也可幫助細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)及維持某些特殊細(xì)胞系的生長(zhǎng),。***和生長(zhǎng)因子在大多數(shù)常規(guī)培養(yǎng)基的配方中都沒(méi)有注明,，但在無(wú)血清培養(yǎng)基中通常要加入它們,，用其來(lái)代替血清中的***能增加多種不同類(lèi)型細(xì)胞的貼瓶率；生長(zhǎng)因子包括FGF家族,、EGF,、PDGF、IGF－1和IGF－2及白介素等,，生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子有著***的特異性,，一般與***或其它物質(zhì)起相互協(xié)同或加成作用。另一種常見(jiàn)的添加物就是血清替代物,，目前已有許多可完全或部分替代傳統(tǒng)培養(yǎng)液中血清成分的商業(yè)產(chǎn)品,，其穩(wěn)定性較好，但批次間仍有差別,，產(chǎn)品的成分也不很確定,。干粉培養(yǎng)基原倍液的配制1）配制過(guò)濾**的細(xì)胞培養(yǎng)基(1)閱讀培養(yǎng)基使用說(shuō)明，確定需要添加何種添加劑（如NaHCO3,、L-谷氨酰胺,、**酸鈉、HEPES等）,。(2)根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中,，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下，并入容器,。加注射用水至總體積的95％,，輕微攪拌溶解。(3)加入規(guī)定量的碳酸氫鈉及所要添加的物質(zhì),。(4)輕微攪拌溶解,，加注射用水至規(guī)定體積。(5)用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)pH至所需值,。(6)用μm濾膜正壓過(guò)濾**,。。減血清培養(yǎng)基減少了實(shí)驗(yàn)中血清帶來(lái)的變異性,。上海減血清培養(yǎng)基

MEM培養(yǎng)基適用于多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)研究。海南基礎(chǔ)培養(yǎng)基價(jià)格信息

    這些重組蛋白和動(dòng)物來(lái)源成分對(duì)生物制品的安全性有很大影響,。成本低,。主要用途應(yīng)用案例采用199(SLM)、MEM(SLM)和DMEM（SLM）低血清培養(yǎng)基分別培養(yǎng)Vero細(xì)胞,、BHK21細(xì)胞和CHO細(xì)胞,，新生牛血清用量可以從10％降至3％，減少新生牛血清使用批次和批間差的影響,，減少生物制品純化損失,，減少由于不確定蛋白或者其它血清組分帶來(lái)干擾和差異的風(fēng)險(xiǎn),，提高制品安全性。低血清培養(yǎng)基可以在方瓶,、3L轉(zhuǎn)瓶,、15L轉(zhuǎn)瓶及生物反應(yīng)器中培養(yǎng)細(xì)胞，在*苗生產(chǎn)中可以達(dá)到低血清高密度的培養(yǎng)效果,。低血清培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分優(yōu)于基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，易使細(xì)胞增殖迅速，代謝旺盛,，代謝產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞有不良影響,，易產(chǎn)生細(xì)胞老化脫落現(xiàn)象。因此需要適當(dāng)增加換液次數(shù),，增加傳代頻率,。獲取同樣的細(xì)胞量，用低血清培養(yǎng)基將比用傳統(tǒng)培養(yǎng)基縮短近1/3的時(shí)間,，可提高生產(chǎn)效率,。采用199(SLM)低血清培養(yǎng)基培養(yǎng)Vero細(xì)胞分泌狂犬*苗病毒，滴度明顯高于采用199培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)獲得的滴度,。采MEM(SLM)低血清培養(yǎng)基BHK21細(xì)胞,，在本實(shí)驗(yàn)情況下12代內(nèi)細(xì)胞形態(tài)和致密度均優(yōu)于MEM培養(yǎng)基傳統(tǒng)培養(yǎng)情況，因而可以預(yù)期其產(chǎn)生的口蹄*,、甲肝等*苗生產(chǎn)的病毒產(chǎn)量將提高,。低血清培養(yǎng)基用于反應(yīng)器Vero細(xì)胞狂犬*苗的生產(chǎn)，實(shí)踐證明效果良好,。采DMEM,。海南基礎(chǔ)培養(yǎng)基價(jià)格信息