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然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五,、第六孔中，再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中，再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九,、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉,。2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻。3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用,。5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。7.溫育：操作同3,。8.洗滌：操作同5,。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)。

瑞普信WesternBlot（WB）實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)一步到位,。蛋白質(zhì)免疫印跡法(WesternBlot),，簡稱WB，是指通過SDS-PAGE膠將不同分子量的蛋白質(zhì)分離開,，然后將目標(biāo)蛋白轉(zhuǎn)移到載體(PVDF)膜上,，利用抗原抗體的特異性結(jié)合，用特異性的一抗結(jié)合目標(biāo)蛋白,，用HRP標(biāo)記的二抗結(jié)合一抗,，再加以ECL發(fā)光液顯色，檢測(cè)組織或者細(xì)胞內(nèi)某種或者某些特異性蛋白質(zhì)的表達(dá),。蛋白質(zhì)免疫印跡是做蛋白質(zhì)分析的一種常規(guī)技術(shù),，常用于鑒定某種蛋白，并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析,，還可以用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì),、蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA相互作用后續(xù)分析,。代測(cè)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)就找成都瑞普信,！

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