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用此探針在DNA文庫(kù)中篩選,,陽性克隆即是目標(biāo)蛋白的編碼基因,。值得一提的是真核細(xì)胞和原核細(xì)胞DNA組織有所不同。真核基因中含有非編碼的內(nèi)含子序列,,而原核則沒有,。因此,,真核基因組DNA探針用于檢測(cè)基因表達(dá)時(shí)雜交效率要明顯低于cDNA探針。DNA探針(包括cDNA探針)的主要優(yōu)點(diǎn)有下面三點(diǎn):①這類探針多克隆在質(zhì)粒載體中,,可以無限繁殖,,取之不盡,制備方法簡(jiǎn)便,。②DNA探針不易降解(相對(duì)RNA而言),,一般能有效抑制DNA酶活性。③DNA探針的標(biāo)記方法較成熟,,有多種方法可供選擇,,如缺口平移,隨機(jī)引物法,,PCR標(biāo)記法等,,能用于同位素和非同位素標(biāo)記。電子束轟擊樣品表面將產(chǎn)生特征X射線,,不同的元素有不同的X射線特征波長(zhǎng)和能量,。普陀區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針銷售廠家
在不損耗試樣的情況下,電子探針通常能分析直徑和深度不小于1微米范圍內(nèi),、原子序數(shù)4以上的所有元素,;但是對(duì)原子序數(shù)小于12的元素,其靈敏度較差,。常規(guī)分析的典型檢測(cè)相對(duì)靈敏度為萬分之一,,在有些情況下可達(dá)十萬分之一。檢測(cè)的***靈敏度因元素而異,,一般為10-14~10-16克,。用這種方法可以方便地進(jìn)行點(diǎn)、線,、面上的元素分析,,并獲得元素分布的圖象。對(duì)原子序數(shù)高于10,、濃度高于10%的元素,,定量分析的相對(duì)精度優(yōu)于±2%。電子探針儀是 X射線光譜學(xué)與電子光學(xué)技術(shù)相結(jié)合而產(chǎn)生的,。1948年法國(guó)的R.卡斯坦制造了***臺(tái)電子探針儀,。1958年法國(guó)首先制造出商品儀器。電子探針儀與掃描電子顯微鏡在結(jié)構(gòu)上有許多共同處,。70年代以來生產(chǎn)的電子探針儀上一般都帶有掃描電子顯微鏡功能,,有的還附加另一些附件,使之除作微區(qū)成分分析外,,還能觀察和研究微觀形貌,、晶體結(jié)構(gòu)等,。靜安區(qū)挑選探針現(xiàn)價(jià)波譜儀的關(guān)鍵在于怎樣實(shí)現(xiàn)將未知的特征譜線與已知元素Z聯(lián)系起來?
DNA探針根據(jù)其來源分為3種:一種來源于基因組中的基因本身,,稱為基因組探針(genomic probe),,可以是基因的全序列,或者基因上的一段序列,;另一種是從相應(yīng)的基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄獲得mRNA,,再通過逆轉(zhuǎn)錄得到的探針,稱為cDNA探針(cDNA probe),;此外,,還可在體外人工合成20~50個(gè)堿基的與基因序列互補(bǔ)的DNA片段,稱為寡核苷酸探針,。 [1]基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用,。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的,。以細(xì)菌為例,,細(xì)菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個(gè)基因,。要獲得某細(xì)菌特異的核酸探針,,通常要采取建立細(xì)菌基因組DNA文庫(kù)的辦法,即將細(xì)菌DNA切成小片段后(如用限制性內(nèi)切酶做不完全水解)分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫(kù),,然后用多種其他菌種的DNA探針來篩選,,產(chǎn)生雜交信號(hào)的克隆被剔除,***剩下的不與任何其他細(xì)菌雜交的克隆則可能含有該細(xì)菌特異性DNA片段,。
基因探針,,即核酸探針,是一段帶有檢測(cè)標(biāo)記,,且順序已知的,,與目的基因互補(bǔ)的核酸序列(DNA或RNA)?;蛱结樛ㄟ^分子雜交與目的基因結(jié)合,,產(chǎn)生雜交信號(hào),能從浩瀚的基因組中把目的基因顯示出來,。根據(jù)雜交原理,,作為探針的核酸序列至少必須具備以下兩個(gè)條件:①應(yīng)是單鏈,若為雙鏈,,必須先行變性處理。②應(yīng)帶有容易被檢測(cè)的標(biāo)記,。它可以包括整個(gè)基因,,也可以**是基因的一部分,;可以是DNA本身,也可以是由之轉(zhuǎn)錄而來的RNA,。DNA探針根據(jù)其來源有3種:一種來自基因組中有關(guān)的基因本身,,稱為基因組探針(genomic probe);另一種是從相應(yīng)的基因轉(zhuǎn)錄獲得了mRNA,,再通過逆轉(zhuǎn)錄得到的探針,,稱為cDNA探針(cDNA probe)。與基因組探針不同的是,,cDNA探針不含有內(nèi)含子序列,。此外,還可在體外人工合成堿基數(shù)不多的與基因序列互補(bǔ)的DNA片段,,稱為寡核苷酸探針,。計(jì)算時(shí)應(yīng)用布拉格方程:nλ=2dsinθ。
這樣我們可以事先建立一系列θ角與相應(yīng)元素的對(duì)應(yīng)關(guān)系,,當(dāng)某個(gè)由電子束激發(fā)的X特征射線照射到分光晶體上時(shí),,我們可在與入射方向交成2θ角的相應(yīng)方向上接收到該波長(zhǎng)的X射線信號(hào),同時(shí)也就測(cè)出了對(duì)應(yīng)的化學(xué)元素,。只要令探測(cè)器連續(xù)進(jìn)行2θ角的掃描,,即可在整個(gè)元素范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)連續(xù)測(cè)量。由分光晶體所分散的單一波長(zhǎng)X射線被X射線檢測(cè)器接受,,常用的檢測(cè)器一般是正比計(jì)數(shù)器,。當(dāng)某一X射線光子進(jìn)入計(jì)數(shù)管后,管內(nèi)氣體電離,,并在電場(chǎng)作用下產(chǎn)生電脈沖信號(hào),。把電子顯微鏡和電子探針結(jié)合,可把在顯微鏡下觀察到的顯微組織和元素成分聯(lián)系起來,。普陀區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針銷售廠家
這種偽隨機(jī)mac可避免無任何操作下WiFi探針對(duì)當(dāng)前環(huán)境的被動(dòng)監(jiān)測(cè),iOS 9.0以上版本也有類似機(jī)制,。普陀區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針銷售廠家
電子探針可以對(duì)試樣中微小區(qū)域(微米級(jí))的化學(xué)組成進(jìn)行定性或定量分析??梢赃M(jìn)行點(diǎn),、線掃描(得到層成分分布信息)、面掃描分析(得到成分面分布圖像),。還能全自動(dòng)進(jìn)行批量(預(yù)置9999測(cè)試點(diǎn))定量分析,。由于電子探針技術(shù)具有操作迅速簡(jiǎn)便(相對(duì)復(fù)雜的化學(xué)分析方法而言)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的解釋直截了當(dāng),、分析過程不損壞樣品,、測(cè)量準(zhǔn)確度較高等優(yōu)點(diǎn),故在冶金、地質(zhì),、電子材料,、生物、醫(yī)學(xué),、考古以及其它領(lǐng)域中得到日益***地應(yīng)用,,是礦物測(cè)試分析和樣品成分分析的重要工具。普陀區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針銷售廠家
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