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電子探針?lè)治鍪侵敢跃劢沟母咚匐娮觼?lái)激發(fā)出試樣表面組成元素的特征X射線,,對(duì)微區(qū)成分進(jìn)行定性或定量分析的一種材料物理試驗(yàn),,又稱電子探針X射線顯微分析。電子探針?lè)治龅脑硎牵阂詣?dòng)能為10~30千電子伏的細(xì)聚焦電子束轟擊試樣表面,,擊出表面組成元素的原子內(nèi)層電子,,使原子電離,此時(shí)外層電子迅速填補(bǔ)空位而釋放能量,,從而產(chǎn)生特征X射線。電子探針的功能主要是進(jìn)行微區(qū)成分分析,。它是在電子光學(xué)和X射線光譜學(xué)原理的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種高效率分析儀器,。其原理是用細(xì)聚焦電子束入射樣品表面,激發(fā)出樣品元素的特征x射線,,分析特征X射線的波長(zhǎng)(或特征能量)即可知道樣品中所含元素的種類(定性分析),,分析X射線的強(qiáng)度,則可知道樣品中對(duì)應(yīng)元素含量的多少(定量分析),。能進(jìn)行微區(qū)分析,。可分析數(shù)個(gè)μm3內(nèi)元素的成分,。黃浦區(qū)品牌探針推薦貨源
DNA探針根據(jù)其來(lái)源分為3種:一種來(lái)源于基因組中的基因本身,,稱為基因組探針(genomic probe),可以是基因的全序列,,或者基因上的一段序列,;另一種是從相應(yīng)的基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄獲得mRNA,再通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄得到的探針,,稱為cDNA探針(cDNA probe),;此外,還可在體外人工合成20~50個(gè)堿基的與基因序列互補(bǔ)的DNA片段,,稱為寡核苷酸探針,。 [1]基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用。要得到一種特異性DNA探針,,常常是比較煩瑣的,。以細(xì)菌為例,細(xì)菌的基因組大小約為5×106堿基,,約含3000個(gè)基因,。要獲得某細(xì)菌特異的核酸探針,通常要采取建立細(xì)菌基因組DNA文庫(kù)的辦法,,即將細(xì)菌DNA切成小片段后(如用限制性內(nèi)切酶做不完全水解)分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫(kù),,然后用多種其他菌種的DNA探針來(lái)篩選,產(chǎn)生雜交信號(hào)的克隆被剔除,***剩下的不與任何其他細(xì)菌雜交的克隆則可能含有該細(xì)菌特異性DNA片段,。黃浦區(qū)品牌探針推薦貨源光學(xué)顯微鏡目測(cè)系統(tǒng),。用以準(zhǔn)確選擇需要分析的區(qū)域,并作光學(xué)觀察,。
進(jìn)行分子突變需要大量的探針拷貝,,后者一般是通過(guò)分子克隆(molecular cloning)獲得的,??寺∈侵赣脽o(wú)性繁殖方法獲得同一個(gè)體、細(xì)胞或分子的大量復(fù)制品,。當(dāng)制備基因組DNA探針前,,應(yīng)先制備基因組文庫(kù),即把基因組DNA打斷,,或用限制性酶作不完全水解,,得到許多大小不等的隨機(jī)片段,將這些片段體外重組到運(yùn)載體(噬菌體,、質(zhì)粒等)中去,,再將后者轉(zhuǎn)染適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞如大腸肝菌,這時(shí)在固體培養(yǎng)基上可以得到許多攜帶有不同DNA片段的克隆噬菌斑,,通過(guò)原位雜交,,從中可篩出含有目的基因片段的克隆,然后通過(guò)細(xì)胞擴(kuò)增,,制備出大量的探針,。
基因探針,即核酸探針,,是一段帶有檢測(cè)標(biāo)記,,且順序已知的,與目的基因互補(bǔ)的核酸序列(DNA或RNA),?;蛱结樛ㄟ^(guò)分子雜交與目的基因結(jié)合,產(chǎn)生雜交信號(hào),,能從浩瀚的基因組中把目的基因顯示出來(lái),。根據(jù)雜交原理,作為探針的核酸序列至少必須具備以下兩個(gè)條件:①應(yīng)是單鏈,,若為雙鏈,,必須先行變性處理。②應(yīng)帶有容易被檢測(cè)的標(biāo)記,。它可以包括整個(gè)基因,,也可以**是基因的一部分,;可以是DNA本身,也可以是由之轉(zhuǎn)錄而來(lái)的RNA,。DNA探針根據(jù)其來(lái)源有3種:一種來(lái)自基因組中有關(guān)的基因本身,,稱為基因組探針(genomic probe);另一種是從相應(yīng)的基因轉(zhuǎn)錄獲得了mRNA,,再通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄得到的探針,,稱為cDNA探針(cDNA probe)。與基因組探針不同的是,,cDNA探針不含有內(nèi)含子序列,。此外,還可在體外人工合成堿基數(shù)不多的與基因序列互補(bǔ)的DNA片段,,稱為寡核苷酸探針,。掃描電子探針儀是美國(guó)于1960年制成,不僅能對(duì)試樣作點(diǎn)或微區(qū)分析,,而且能對(duì)樣品表面微區(qū)進(jìn)行掃描。
用此探針在DNA文庫(kù)中篩選,,陽(yáng)性克隆即是目標(biāo)蛋白的編碼基因,。值得一提的是真核細(xì)胞和原核細(xì)胞DNA組織有所不同。真核基因中含有非編碼的內(nèi)含子序列,,而原核則沒(méi)有,。因此,真核基因組DNA探針用于檢測(cè)基因表達(dá)時(shí)雜交效率要明顯低于cDNA探針,。DNA探針(包括cDNA探針)的主要優(yōu)點(diǎn)有下面三點(diǎn):①這類探針多克隆在質(zhì)粒載體中,,可以無(wú)限繁殖,取之不盡,,制備方法簡(jiǎn)便,。②DNA探針不易降解(相對(duì)RNA而言),一般能有效抑制DNA酶活性,。③DNA探針的標(biāo)記方法較成熟,,有多種方法可供選擇,如缺口平移,,隨機(jī)引物法,,PCR標(biāo)記法等,能用于同位素和非同位素標(biāo)記,。它的作用是選擇和確定分析點(diǎn),。靜安區(qū)優(yōu)勢(shì)探針品牌
1953年前蘇聯(lián)制成了X射線微區(qū)分析儀,以后英,、美等國(guó)陸續(xù)生產(chǎn),。黃浦區(qū)品牌探針推薦貨源
體外轉(zhuǎn)錄技術(shù)不斷完善,已相繼建立了單向和雙向體外轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)。該系統(tǒng)主要基于一類新型載體pSP和pGEM,,這類載體在多克隆位點(diǎn)兩側(cè)分別帶有SP6啟動(dòng)子和T7啟動(dòng)子,,在SP6RNA聚合酶或T7RNA聚合酶作用下可以進(jìn)行RNA轉(zhuǎn)錄,如果在多克隆位點(diǎn)接頭中插入了外源DNA片段,,則可以此DNA兩條鏈中的一條為模板轉(zhuǎn)錄生成RNA,。這種體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)效率很高,在1h內(nèi)可合成近10μg的RNA產(chǎn)生,,只要在底物中加入適量的放射性或生物素標(biāo)記的NTP,,則所合成的RNA可得到高效標(biāo)記。該方法能有效地控制探針的長(zhǎng)度并可提高標(biāo)記物的利用率,。黃浦區(qū)品牌探針推薦貨源
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