DNA探針(DNA probe)是**常用的核酸探針,為長度在幾十到幾百甚至上千堿基對(duì)的單鏈或雙鏈DNA,,用特殊示蹤劑(如同位素、酶或有色基團(tuán))進(jìn)行標(biāo)記,;在適當(dāng)?shù)膒H值,、溫度和離子強(qiáng)度下,DNA探針利用分子的變性,、復(fù)性以及堿基互補(bǔ)配對(duì)的高度精確性,,能與待測(cè)樣本中互補(bǔ)的非標(biāo)記單鏈DNA或RNA以氫鍵結(jié)合(雜交),形成雙鏈復(fù)合物(雜交體),。雜交體的穩(wěn)定性取決于兩條單鏈核苷酸之間的互補(bǔ)程度,。在嚴(yán)格的條件下(高pH值,、高溫,、低離子強(qiáng)度),不完全匹配的雜交體的兩鏈將會(huì)解離,,而完全匹配的雜交體將保持雙鏈,。將未配對(duì)結(jié)合的探針洗去后,可用放射自顯影或酶聯(lián)反應(yīng)等檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)雜交反應(yīng)結(jié)果,。可以進(jìn)行點(diǎn),、線掃描(得到層成分分布信息),、面掃描分析(得到成分面分布圖像)。寶山區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針商家
在原核表達(dá)系統(tǒng)中外源基因不僅進(jìn)行正向轉(zhuǎn)錄,,有時(shí)還存在反向轉(zhuǎn)錄(即生成反義RNA),這種現(xiàn)象往往是外源基因表達(dá)不高的重要原因,。另外,,在真核系統(tǒng),某些基因也存在反向轉(zhuǎn)錄,,產(chǎn)生反義RNA,參與自身表達(dá)的調(diào)控,。在這些情況下,,要準(zhǔn)確測(cè)定正向和反向轉(zhuǎn)錄水平就不能用雙鏈DNA探針,而只能用RNA探針或單鏈DNA探針,。探針是能與特異靶分子反應(yīng)并帶有供反應(yīng)后檢測(cè)的合適標(biāo)記物的分子。利用核苷酸堿基順序互補(bǔ)的原理,,用特異的基因探針即識(shí)別特異堿基序列的有標(biāo)記的一段單鏈DNA(或RNA)分子,,與被測(cè)定的靶序列互補(bǔ),,以檢測(cè)被測(cè)靶序列的技術(shù)叫核酸探針技術(shù),。探針制備就是將目的基因進(jìn)行標(biāo)記。楊浦區(qū)品牌探針品牌探針卡是一種測(cè)試接口,,主要對(duì)裸芯進(jìn)行測(cè)試,,通過連接測(cè)試機(jī)和芯片,通過傳輸信號(hào)對(duì)芯片參數(shù)進(jìn)行測(cè)試.,。
電子探針X射線顯微分析儀(簡稱電子探針)利用約1Pm的細(xì)焦電子束,在樣品表層微區(qū)內(nèi)激發(fā)元素的特征X射線,,根據(jù)特征X射線的波長和強(qiáng)度,,進(jìn)行微區(qū)化學(xué)成分定性或定量分析,。電子探針的光學(xué)系統(tǒng)、真空系統(tǒng)等部分與掃描電鏡基本相同,,通常也配有二次電子和背散射電子信號(hào)檢測(cè)器,,同時(shí)兼有組織形貌和微區(qū)成分分析兩方面的功能。電子探針的構(gòu)成除了與掃描電鏡結(jié)構(gòu)相似的主機(jī)系統(tǒng)以外,,還主要包括分光系統(tǒng),、檢測(cè)系統(tǒng)等部分,。電子探針主要由電子光學(xué)系統(tǒng)(鏡筒),X射線譜儀和信息記錄顯示系統(tǒng)組成,。電子探針和掃描電鏡在電子光學(xué)系統(tǒng)的構(gòu)造基本相同,,它們常常組合成單一的儀器。
特異性探針有三種形式——cDNA,、RNA、寡核苷酸,。cDNA和寡核苷酸是**常采用的探針,。RNA探針用途很廣,也容易獲得,,但其不穩(wěn)定性限制了其商業(yè)用途。cDNA探針的獲得是,,將特定的基因片段裝載到質(zhì)?;蚴删w中,經(jīng)過擴(kuò)增、酶切,、純化等復(fù)雜的步驟,才能得到一定長度的cDNA探針,。這一過程比較復(fù)雜,,有相應(yīng)條件的實(shí)驗(yàn)室才能做到。寡核苷酸探針是在已知基因序列的情況下,,由核酸合成儀來完成,,可廉價(jià)獲得大量的此類探針,。質(zhì)量也相對(duì)來說更為穩(wěn)定。由于cDNA探針長度通常為數(shù)百至數(shù)千個(gè)堿基,,所以有良好的信號(hào)放大作用,但其滲透性比較差,。寡核苷酸探針一般為十?dāng)?shù)個(gè)至數(shù)十個(gè)堿基,,滲透性強(qiáng),,但信號(hào)放大作用則較差,合成的多相寡核苷酸探針,,敏感性可以達(dá)到cDNA探針?biāo)?。電子束轟擊樣品表面將產(chǎn)生特征X射線,不同的元素有不同的X射線特征波長和能量,。
2)X射線能譜分析法。無須分析晶體,,而直接將探測(cè)器接收的訊號(hào)加以放大,,進(jìn)行脈沖幅度分析,通過選擇不同的脈沖幅度來確定入射x射線的能量,,從而區(qū)分不同的特征X射線,。計(jì)算時(shí)應(yīng)用布拉格方程:nλ=2dsinθ,。 [2]1、能進(jìn)行微區(qū)分析,??煞治鰯?shù)個(gè)μm3內(nèi)元素的成分。2、能進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)分析,。無需把分析對(duì)象從樣品中取出,可直接對(duì)大塊試樣中的微小區(qū)域進(jìn)行分析,。把電子顯微鏡和電子探針結(jié)合,,可把在顯微鏡下觀察到的顯微組織和元素成分聯(lián)系起來。3,、分析范圍廣,。Z>4其中,,波譜:Be~U,能譜:Na~U,。對(duì)于任意一個(gè)給定的入射角θ有一個(gè)確定的波長λ滿足衍射條件,。崇明區(qū)特制探針維修價(jià)格
分析范圍廣。Z>4其中,,波譜:Be~U,能譜:Na~U,。寶山區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針商家
DNA探針根據(jù)其來源分為3種:一種來源于基因組中的基因本身,,稱為基因組探針(genomic probe),可以是基因的全序列,,或者基因上的一段序列;另一種是從相應(yīng)的基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄獲得mRNA,,再通過逆轉(zhuǎn)錄得到的探針,,稱為cDNA探針(cDNA probe);此外,,還可在體外人工合成20~50個(gè)堿基的與基因序列互補(bǔ)的DNA片段,,稱為寡核苷酸探針,。 [1]基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用。要得到一種特異性DNA探針,,常常是比較煩瑣的,。以細(xì)菌為例,細(xì)菌的基因組大小約為5×106堿基,,約含3000個(gè)基因,。要獲得某細(xì)菌特異的核酸探針,通常要采取建立細(xì)菌基因組DNA文庫的辦法,,即將細(xì)菌DNA切成小片段后(如用限制性內(nèi)切酶做不完全水解)分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫,,然后用多種其他菌種的DNA探針來篩選,產(chǎn)生雜交信號(hào)的克隆被剔除,,***剩下的不與任何其他細(xì)菌雜交的克隆則可能含有該細(xì)菌特異性DNA片段。寶山區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針商家
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