基因探針,即核酸探針,,是一段帶有檢測(cè)標(biāo)記,且順序已知的,與目的基因互補(bǔ)的核酸序列(DNA或RNA),。基因探針通過分子雜交與目的基因結(jié)合,,產(chǎn)生雜交信號(hào),,能從浩瀚的基因組中把目的基因顯示出來。根據(jù)雜交原理,,作為探針的核酸序列至少必須具備以下兩個(gè)條件:①應(yīng)是單鏈,,若為雙鏈,必須先行變性處理,。②應(yīng)帶有容易被檢測(cè)的標(biāo)記,。它可以包括整個(gè)基因,,也可以**是基因的一部分;可以是DNA本身,,也可以是由之轉(zhuǎn)錄而來的RNA,。DNA探針根據(jù)其來源有3種:一種來自基因組中有關(guān)的基因本身,稱為基因組探針(genomic probe),;另一種是從相應(yīng)的基因轉(zhuǎn)錄獲得了mRNA,,再通過逆轉(zhuǎn)錄得到的探針,稱為cDNA探針(cDNA probe),。與基因組探針不同的是,,cDNA探針不含有內(nèi)含子序列。此外,,還可在體外人工合成堿基數(shù)不多的與基因序列互補(bǔ)的DNA片段,,稱為寡核苷酸探針。1953年前蘇聯(lián)制成了X射線微區(qū)分析儀,,以后英,、美等國陸續(xù)生產(chǎn)。長(zhǎng)寧區(qū)優(yōu)勢(shì)探針按需定制
探針的標(biāo)記方式有放射性標(biāo)記和非放射性標(biāo)記,。標(biāo)記物質(zhì)有放射性元素(如32P等)和非放射性物質(zhì)(如生物素,、地高辛等)。32P是**常用的核苷酸標(biāo)記同位素,,被標(biāo)記的dNTP本身就帶有磷酸基團(tuán),,便于標(biāo)記。特點(diǎn)是比活性高,,可達(dá)9000Ci/mmol,;發(fā)射的β射線能量高。用它標(biāo)記的探針自顯影時(shí)間短,,靈敏度高,。32P的半壽期短,雖使用不方便,,但為廢棄物的處理減輕了壓力,。非放射性標(biāo)記法有酶標(biāo)法和化學(xué)物標(biāo)記法。酶標(biāo)方法與免疫測(cè)定ELISA方法相似,,只是被標(biāo)記的核酸代替了被標(biāo)記的抗體,,事實(shí)上被標(biāo)記的抗體也稱為探針,現(xiàn)有許多商品是生物素,、地高辛標(biāo)記的,。普陀區(qū)優(yōu)勢(shì)探針推薦貨源(1)電子光學(xué)系統(tǒng)。電子束直徑0.1~1μm,電子束穿透深度1~3μm,。
2.界面探針(Interface Probes)非標(biāo)準(zhǔn)的探針,,一般是為少數(shù)做大型測(cè)試機(jī)臺(tái)的客戶定做的,例如泰瑞達(dá)(Teradyne)和安捷倫(Agilent).用于測(cè)試機(jī)臺(tái)與測(cè)試夾具的接觸點(diǎn)和面.3.微型探針(MicroSeries Probes)兩個(gè)測(cè)試點(diǎn)中心間距一般為0.25mm至0.76mm.4.開關(guān)探針(Switch Probes)開關(guān)探針單獨(dú)一支探針有兩路電流.5.高頻探針(Coaxial Probes)用于測(cè)試高頻信號(hào),,有帶屏蔽圈的可測(cè)試10GHz以內(nèi)的和500MHz不帶屏蔽圈的.6.旋轉(zhuǎn)探針(Rotator Probes)彈力一般不高,,因?yàn)槠浯┩感员緛砭秃軓?qiáng),一般用于OSP處理過的PCBA測(cè)試.
禽流感基因探針制備探針濃度鑒定將禽流感病毒H9N2亞型毒株**白(NP)基因3′端較為保守的,、約350bp的編碼序列通過限制性內(nèi)切酶Hae¸切割,、分離后,用隨機(jī)引物法制備Digoxigenin2112dUTP標(biāo)記探針。測(cè)定該探針的濃度為100Lgöml,。特異性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該探針只能與實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的,、含有NP基因的重組載體pGEM2TE2NP和pBacPAK2NP以及A型流感病毒H9N2亞型、H3N2亞型以及H9N3亞型毒株基因組RNA結(jié)合出現(xiàn)特異性的顏色反應(yīng),而與實(shí)驗(yàn)室常用的載體pGEM2Teasy,、pBacPAK2His3,、pTARGET和pGEMEX22以及新城疫病毒、傳染***毒和傳染性喉氣管炎病毒基因組不發(fā)生反應(yīng),。應(yīng)用該探針檢測(cè)含NP基因的重組載體和重組病毒證明該探針是有效的,可用于含禽流感病毒樣品或材料的檢測(cè),。電子探針的構(gòu)成除了與掃描電鏡結(jié)構(gòu)相似的主機(jī)系統(tǒng)以外,還主要包括分光系統(tǒng),、檢測(cè)系統(tǒng)等部分,。
(3)X射線強(qiáng)度測(cè)量系統(tǒng)。特征X射線,,由B系統(tǒng)中的計(jì)數(shù)管接收,,并轉(zhuǎn)換成電脈沖,通過脈沖高度分析儀,、計(jì)數(shù)率計(jì),、定標(biāo)器、電子電位計(jì)將其強(qiáng)度測(cè)量出來,。(4)光學(xué)顯微鏡目測(cè)系統(tǒng),。用以準(zhǔn)確選擇需要分析的區(qū)域,并作光學(xué)觀察,。(5)背散射電子圖像系統(tǒng),。(6)吸收電子圖像系統(tǒng)。(7)特征X射線圖像系統(tǒng),。電子探針的技術(shù)**是利用X射線晶體光學(xué),,主要應(yīng)用兩種方法:1)晶體衍射法(X射線光譜法)。利用晶體轉(zhuǎn)到一定角度,,來衍射某種波長(zhǎng)的X射線,通過讀出晶體不同的衍射角,,求出X射線的波長(zhǎng),,從而定出樣品所含的元素,。電子探針又稱微區(qū)X射線光譜分析儀、X射線顯微分析儀,。上海挑選探針銷售廠家
還能全自動(dòng)進(jìn)行批量(預(yù)置9999測(cè)試點(diǎn))定量分析,。長(zhǎng)寧區(qū)優(yōu)勢(shì)探針按需定制
3 面分析用于測(cè)定某種元素的面分布情況。方法是將X射線譜儀固定在所要測(cè)量的某元素特征X射線信號(hào)的位置上,,電子束在樣品表面做光柵掃描,,此時(shí)在熒光屏上便可看到該元素的面分布圖像。顯像管的亮度由試樣給出的X射線強(qiáng)度調(diào)制,。圖像中的亮區(qū)表示這種元素的含量較高,。定量分析定量分析時(shí),先測(cè)得試樣中Y元素的特征X射線強(qiáng)度IY,,再在同一條件下測(cè)出已知純?cè)豗的標(biāo)準(zhǔn)試樣特征X射線強(qiáng)度IO,。然后兩者分別扣除背底和計(jì)數(shù)器死時(shí)間對(duì)所測(cè)值的影響,得到相應(yīng)的強(qiáng)度值IY和IO,,兩者相除得到X射線強(qiáng)度之比KY= IY / IO,。 直接將測(cè)得的強(qiáng)度比KY當(dāng)作試樣中元素Y的重量濃度,其結(jié)果還有很大誤差,,通常還需進(jìn)行三種效應(yīng)的修正,。即原子序數(shù)效應(yīng)的修正,吸收效應(yīng)修正,,熒光效應(yīng)修正,。經(jīng)過修正,誤差可控制在±2%以內(nèi),。長(zhǎng)寧區(qū)優(yōu)勢(shì)探針按需定制
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