關(guān)于單細胞測序?qū)嶒灅颖局苽洌@與流式細胞術(shù)用戶熟悉的步驟完全一致,，也就是通過酶促或機械消化,、細胞分選或其他細胞分離技術(shù)從整個樣本中制備生成活的單細胞懸液。隨后是細胞計數(shù)和質(zhì)量控制步驟,，以確保您的樣本有適當濃度的活細胞,，并且不含細胞團塊和死細胞碎片。如有必要,，您還可以使用抗體對樣本進行染色,，標記細胞表面蛋白或其他生物分析物，或者通過FACS來富集感興趣的細胞類型,。解離樣本時采取的具體步驟將根據(jù)您的起始材料和實驗目標而定,。也許需要額外的制備步驟，具體取決于組織質(zhì)量,、樣本豐度,、細胞大小，以及是否需要提取出細胞核進行染色質(zhì)可接近性分析,。無論具體的考慮因素如何,，所有樣本類型都遵循同一個基本原則，那就是生成高質(zhì)量的單細胞懸液,。單細胞測序因其強大的探究疾病--細胞--基因的關(guān)系,，一度成為高通量測序技術(shù)的“天花板”。沈陽單細胞測序技術(shù)支持

10× Genomics官方建議,，當單細胞懸液活性低于70%時應(yīng)做去除死細胞操作,，并推薦使用MACS? Dead Cell Removal Kit(Miltenyi Biotec),。需要注意到,，去除死細胞的操作會損失一定的細胞數(shù)量，10× Genomics和Miltenyi Biotec都沒有給出單細胞懸液含有多少細胞數(shù)量才建議做去除死細胞的操作,?；诹冶嗄陠渭毎麥y序?qū)嶒灲?jīng)驗，建議當細胞懸液進行質(zhì)量和活性檢測后,，考慮對細胞活性在50%-70%的懸液進行去除死細胞的操作,。而太低活性的懸液（小于30%），懸液中細胞大量死亡,，可能已經(jīng)丟失了原組織內(nèi)的細胞比例和狀態(tài),，失真嚴重，建議重新收集樣本進行新的實驗,，保證數(shù)據(jù)的高質(zhì)量和實驗結(jié)果的準確性,。成都10X Genomics單細胞測序數(shù)據(jù)分析可視化烈冰單細胞測序，助力您的深入科學探究,。

一味的追求高細胞數(shù)量的捕獲,，小心得不償失,，原因在這：單細胞測序所有的分析都是基于細胞聚類進行，而細胞聚類是在區(qū)分cell和non-cell后,，獲得細胞基因表達譜,，通過降維（pca），無監(jiān)督聚類以及可視化（t-SNE）得到的,。進行細胞聚類時需要考慮到每個細胞的基因表達模式,，因此即使是相同的數(shù)據(jù)，在剔除幾個細胞的情況下,，前后獲得的聚類圖也會出現(xiàn)明顯不同,。而當細胞捕獲數(shù)過多時，無論是假陰性和假陽性數(shù)據(jù)還是多細胞數(shù)據(jù),，都會對正常細胞聚類產(chǎn)生影響,，造成聚類結(jié)果失真。這也是很多文章,，特別是很多高分文章,，為什么單個樣本捕獲細胞數(shù)在2000-3000的原因了。烈冰建議單個樣本捕獲細胞數(shù)在3000-5000個時,，數(shù)據(jù)量在100G左右時,，可以滿足分析和文章發(fā)表的多重需求。

10X Genomics和Drop-Seq具有類似的技術(shù)原理,。從橫向孔道中逐一輸入凝膠微珠,，一列縱向孔道輸入細胞，凝膠微珠與細胞碰撞后會吸附在凝膠微珠上,，并通過微流控技術(shù),，將之輸入到第二縱向孔道，即油相孔道中,。這時候,，就形成了一個個油滴并輸出并收集在EP管中。每一個油滴中會落入一個細胞以及一個凝膠微珠,，那么在每一個凝膠微珠中上長滿了不同的Cell Barcode和UMI Barcode連接形成的序列,，再加上一端PolyT的抓手，構(gòu)成我們的捕獲凝膠微珠,。而這個凝膠微珠抓手就會使用oligo dT抓住mRNA構(gòu)建文庫,。烈冰生物為您提供多平臺一站式全流程單細胞測序服務(wù)。

針對單細胞測序數(shù)據(jù)分析時的reads數(shù),、基因表達量及細胞數(shù)量判定過程中：以捕獲5000個細胞,、100G的測序量為標準，每個細胞的reads數(shù)大約在50k左右；每個細胞的基因中位數(shù)取決于樣本的細胞類型,，例如成熟的B,，T，粒細胞數(shù)量較多的組織中,，由于該類型細胞表達的基因數(shù)普遍較少,，導致基因中位數(shù)下降。而某些疾病組織,、或者體外培養(yǎng)的如干細胞等,，他們的基因表達數(shù)較高，甚至可以超過1W,，這就導致該類樣本基因中位數(shù)非常高,。因此，我們對細胞數(shù)量以及基因中位數(shù)確認時,，需要考察實際組織的細胞組成,。深度的單細胞測序數(shù)據(jù)解讀助力醫(yī)療健康大時代。廣州10X單細胞測序數(shù)據(jù)分析可視化

烈冰單細胞多組學測序助您探究細胞類型特異性和基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)特征,。沈陽單細胞測序技術(shù)支持

作為單細胞測序的一個重要里程碑,，10x genomic公司于2016年2月推出10x Chromium Single Cell Gene Expression Solution，此平臺整合了儀器,、試劑盒和信息學軟件,，能精確對接illumina測序儀，因此可實現(xiàn)大量大細胞的快速高效標記,、測序和分析,，獲得單細胞水平的基因表達譜和差異情況，并通過對復雜細胞群體進行深入細致分析,，繪制大規(guī)模單細胞表達圖譜,。 以量化細胞內(nèi)的群體異質(zhì)性，并逐個鑒定細胞類型,、細胞狀態(tài)和動態(tài)細胞躍遷,。除了有望鑒定新的細胞亞型和稀有細胞群體,，單細胞技術(shù)還能更好地了解轉(zhuǎn)錄動態(tài)和基因調(diào)控關(guān)系,。沈陽單細胞測序技術(shù)支持

上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司致力于醫(yī)藥健康，以科技創(chuàng)新實現(xiàn)***管理的追求,。烈冰生物作為生物科技,、醫(yī)藥科技、信息科技,、計算機科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā),、技術(shù)服務(wù)、技術(shù)轉(zhuǎn)讓、技術(shù)咨詢,，市場營銷策劃,，市場信息咨詢與調(diào)查（不得從事社會調(diào)查、社會調(diào)研,、民意調(diào)查,、民意測驗），從事貨物及技術(shù)的進出口業(yè)務(wù),，計算機,、軟件及耗材（除專控）,，軟件開發(fā)【依法須經(jīng)批準的項目,，經(jīng)相關(guān)部門批準后方可開展經(jīng)營活動】的企業(yè)之一，為客戶提供良好的單細胞測序,，生物大數(shù)據(jù)云分析平臺,，空間轉(zhuǎn)錄組測序，單細胞多組學測序,。烈冰生物致力于把技術(shù)上的創(chuàng)新展現(xiàn)成對用戶產(chǎn)品上的貼心,，為用戶帶來良好體驗。烈冰生物始終關(guān)注醫(yī)藥健康行業(yè),。滿足市場需求,，提高產(chǎn)品價值，是我們前行的力量,。