對于單細胞測序而言,，常常需要先構(gòu)建細胞圖譜,，在此基礎(chǔ)上再開展后續(xù)各項分析,，并且數(shù)據(jù)分析時以細胞聚類（cell cluster）為討論對象，而不是像常規(guī)Bulk測序一樣以組別為分析對象,，因此單細胞測序項目對樣本入組要求沒有Bulk測序那樣嚴格,，但是單細胞測序，特別是目的為圖譜研究時,，需要通過提高樣本復(fù)雜度（增加樣本數(shù)），盡可能的構(gòu)建某一疾病類型,、群體細胞圖譜信息,。因此，單細胞測序?qū)嶒炘O(shè)計時首先需要保證生物學(xué)重復(fù),，不同樣本來源的樣本建議單獨進行細胞解離和捕獲,、建庫、測序,，以保證捕獲到足夠的細胞數(shù),，單個樣本分別捕獲細胞時，后續(xù)分析除了整體分析以外,，還可以做單樣本分析,，保證分析的完備準確性。烈冰全線實驗平臺滿足超深度,、大規(guī)模發(fā)現(xiàn)和復(fù)雜疾病研究的測序,。北京二代測序單細胞測序平臺

烈冰科技作為國內(nèi)率先同時擁有10X Genomics和BD Rhapsody雙分選平臺的測序服務(wù)商及云計算服務(wù)供應(yīng)商，經(jīng)過多年實戰(zhàn),，擁有豐富的單細胞懸液制備和分選經(jīng)驗,，實測BD Rhapsody對能夠高效捕獲粒細胞,。針對不同的分選平臺、建庫方法,，實戰(zhàn)總結(jié)搭建出不同的數(shù)據(jù)預(yù)處理工作流程,；烈冰科技NovelBrain?生物大數(shù)據(jù)平臺能有效支撐生命科學(xué)研究、醫(yī)療健康等領(lǐng)域?qū)Υ髷?shù)據(jù)分析的需求,。高通量測序?qū)嶒炂脚_,，包括NovaSeq 6000、10X Chromium X,、BD FACSMelody,、PANNORAMIC數(shù)字切片掃描儀等，配合一支來自海內(nèi)外名校,、多學(xué)科交叉型的高素質(zhì)綜合團隊,，為您的科學(xué)研究保駕護航。廣州10X Chromium X單細胞測序數(shù)據(jù)分析烈冰生物為您提供一站式全流程高通量測序服務(wù),。

單細胞獲得困難,，不同組織要求不盡相同難以搞定？ 烈冰2000+項目消化經(jīng)驗,，100+組織類型解離protocol,，精心設(shè)計不同組織實驗的解離、細胞懸浮實驗體系,，確保單細胞的獲得,。 凍存樣本無法實驗，珍貴樣本無法使用,？ 烈冰采用國際認可的凍存組織復(fù)蘇技術(shù)以及死細胞過濾技術(shù),，確保凍存組織使用。 珍貴樣本,，細胞數(shù)量太少,，消化背景雜無法做單細胞？ 采用國際認可的10X Genomics,，BD Rhapsody雙平臺模式,，根據(jù)樣本實際情況和用戶需求提供客觀有效的實驗方案,細胞量少，背景雜也能做單細胞,。 單細胞RNA分類精度不足,，部分細胞無法細分？ 烈冰同時采用單細胞蛋白質(zhì)組與單細胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù),，真正做到從上游到下游的全流程檢測,，確保超高的細胞分類精度。

Fluidigm C1平臺作為應(yīng)用于單細胞測序（Single Cell RNA Sequencing）領(lǐng)域的商業(yè)化分選技術(shù)，基于富魯達（Fluidigm?）的微流控技術(shù),，大約在幾個小時中可以捕獲96個左右的細胞,，進行各類的Single-Cell測序建庫。當然,，通量還是比較小,。但不可否認的是，現(xiàn)在很多非RNA類Single Cell測序,，仍然在采用這樣的技術(shù),，如Single Cell DNA-Seq，Single Cell ATAC-Seq等,，都是采用此技術(shù)進行單細胞分選后再分別用不同試劑盒建庫,。所以可以說，至少在10X和BD,，或者其他企業(yè)推出有效的Single DNA測序技術(shù)之前,，C1仍然會是市場上的重要組成部分。單細胞測序因其強大的探究疾病--細胞--基因的關(guān)系,，一度成為高通量測序技術(shù)的“天花板”,。

單細胞測序結(jié)果動輒上百G數(shù)據(jù)量，龐大的數(shù)據(jù)對于分析平臺和分析能力有著很高的要求,，首先針對下機數(shù)據(jù)的質(zhì)控環(huán)節(jié)：單細胞測序產(chǎn)生數(shù)億的結(jié)果序列,，不可避免的會出現(xiàn)低質(zhì)量的測序結(jié)果，存在各種情況的序列污染,。因此序列過濾及質(zhì)量評估就會變得極為重要,。序列質(zhì)量主要通過測序質(zhì)量值Q20/Q30的占比來表征，即堿基測序結(jié)果的錯誤率在1% / 0.1%以下的比例,。理想的測序結(jié)果reads的堿基質(zhì)量均高于30,。保證數(shù)據(jù)獲得后的處理結(jié)果的準確性，為后續(xù)細胞類型鑒定和功能分析打下堅實基礎(chǔ),。烈冰引進國際主流單細胞和空間轉(zhuǎn)錄組測序平臺，保障細胞精度的前提下提供組織內(nèi)部精細區(qū)域的空間信息,。長沙10X單細胞測序百萬通量平臺

單細胞測序是高通量測序下的又一重大技術(shù)突破,。北京二代測序單細胞測序平臺

10× Genomics官方建議，當單細胞懸液活性低于70%時應(yīng)做去除死細胞操作,，并推薦使用MACS? Dead Cell Removal Kit(Miltenyi Biotec),。需要注意到，去除死細胞的操作會損失一定的細胞數(shù)量,，10× Genomics和Miltenyi Biotec都沒有給出單細胞懸液含有多少細胞數(shù)量才建議做去除死細胞的操作,。基于烈冰多年單細胞測序?qū)嶒灲?jīng)驗,，建議當細胞懸液進行質(zhì)量和活性檢測后,，考慮對細胞活性在50%-70%的懸液進行去除死細胞的操作,。而太低活性的懸液（小于30%），懸液中細胞大量死亡,，可能已經(jīng)丟失了原組織內(nèi)的細胞比例和狀態(tài),，失真嚴重，建議重新收集樣本進行新的實驗,，保證數(shù)據(jù)的高質(zhì)量和實驗結(jié)果的準確性,。北京二代測序單細胞測序平臺

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