針對(duì)單細(xì)胞測(cè)序的細(xì)胞上樣數(shù),，為什么不建議捕獲到的細(xì)胞數(shù)量越高越好？一味地追求高數(shù)量的細(xì)胞捕獲可能會(huì)存在一些問題,。例如在上機(jī)細(xì)胞懸液濃度固定時(shí),，如果目標(biāo)細(xì)胞捕獲數(shù)增加到8000甚至10000，上樣細(xì)胞懸液體積勢(shì)必增加,，在細(xì)胞懸液質(zhì)量不是很理想（細(xì)胞活性<90%,、碎片率>5%、結(jié)團(tuán)率均>5%）的情況下,，引入的背景信號(hào)會(huì)增加,，分析結(jié)果不理想的直接體現(xiàn)包括：cell、non-cell無法有效區(qū)分和Fraction reads in cells偏低,。當(dāng)cell和non-cell無法有效區(qū)分時(shí),，會(huì)使得數(shù)據(jù)出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果！當(dāng)目標(biāo)細(xì)胞捕獲數(shù)很大時(shí),，多細(xì)胞率會(huì)增加,，數(shù)據(jù)分析時(shí)，此部分“cell”表現(xiàn)為基因檢測(cè)數(shù)和UMI檢測(cè)數(shù)是正常cell的N倍（N是一個(gè)GEM包裹的細(xì)胞數(shù)），導(dǎo)致所有細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)（單個(gè)細(xì)胞基因檢測(cè)中位數(shù),、單個(gè)細(xì)胞UMI檢測(cè)中位數(shù)）虛高,。此部分“cell”雖然可以通過設(shè)置數(shù)據(jù)分析閾值進(jìn)行過濾，但是容易會(huì)有此類數(shù)據(jù)的殘留和正常高基因檢測(cè)細(xì)胞的人為去除,！烈冰測(cè)序服務(wù)已助力300余篇國際期刊研究文章發(fā)表,。蘇州BD單細(xì)胞平臺(tái)

烈冰生物為您的實(shí)驗(yàn)定制工作流程： 對(duì)于不同用戶和實(shí)驗(yàn)，單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)工作流程往往需要不同程度的樣本操作,、質(zhì)量和通量。BD儀器選項(xiàng)可以根據(jù)具體需求進(jìn)行配置,。烈冰生物搭建BD FACS流式分選平臺(tái)（如 BD FACSMelody）,，是上游樣本富集的良好選擇。此外,，我們具備BD Rhapsody單細(xì)胞成像儀提供自動(dòng)化細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞樣本活性測(cè)試,，幫助用戶制備適用于Cartridge微孔板單細(xì)胞捕獲濃度的樣本。掃描儀提供了微孔板上磁珠捕獲細(xì)胞的計(jì)數(shù),。BD Rhapsody 樣品上樣工作站輕巧便攜,，可在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)輕松移動(dòng)。搭配烈冰傾情研發(fā)多年的成果NovelBrain生物信息大數(shù)據(jù)分析系統(tǒng),，完成測(cè)序數(shù)據(jù)的生物信息分析和結(jié)果可視化呈現(xiàn),。這些工具包括 UMI 分析算法和可視化工具，即使沒有經(jīng)驗(yàn)的用戶也可分析和理解單細(xì)胞數(shù)據(jù),?；茨螧D VDJ單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)助力探索生命時(shí)空多維度的動(dòng)態(tài)變化的生物學(xué)信息；助力醫(yī)療健康時(shí)代,！

對(duì)于稀有樣本,，或細(xì)胞量比較少的稀有組織，樣本中每一粒細(xì)胞都很珍貴,，BD Rhapsody單細(xì)胞捕獲平臺(tái)對(duì)該種類型的樣本能實(shí)現(xiàn)友好包容,，如果在實(shí)際實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)因?yàn)闃颖绢愋秃椭苽鋯渭?xì)胞懸液方法的不同,，容易出現(xiàn)單細(xì)胞懸液中死亡細(xì)胞的比例較高的情況,。也會(huì)和您探討是否考慮去除單細(xì)胞懸液中的死細(xì)胞和其他污染物的操作，以獲得高質(zhì)量數(shù)據(jù)是至關(guān)重要的,。這是因?yàn)?，死亡的?xì)胞易裂解導(dǎo)致其中的RNA釋放出來。這種cell-free RNA會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)的背景噪聲,，并會(huì)影響單細(xì)胞數(shù)據(jù)的質(zhì)量,。因此當(dāng)樣本活性較差時(shí)，對(duì)細(xì)胞懸液中細(xì)胞活性檢測(cè)后，需要進(jìn)行一般死細(xì)胞去除的工作（一般懸液活性小于70%時(shí)考慮此操作）,，以保證較高的上機(jī)捕獲細(xì)胞的質(zhì)量,。

機(jī)體為響應(yīng)各種應(yīng)激，其細(xì)胞會(huì)從一種功能“狀態(tài)”轉(zhuǎn)變?yōu)榱硪环N功能“狀態(tài)”,；當(dāng)細(xì)胞在不同狀態(tài)之間轉(zhuǎn)變時(shí),，往往會(huì)經(jīng)歷轉(zhuǎn)錄重組，導(dǎo)致一些基因被沉默,，一些基因被重新“喚醒”,，但純化這些瞬態(tài)細(xì)胞進(jìn)行研究是很困難或不可能的；scRNA-seq擬時(shí)序分析可以讓我們?cè)诓恍枰兓那闆r下查看這些細(xì)胞狀態(tài),。擬時(shí)序分析,，即根據(jù)不同細(xì)胞亞群基因表達(dá)量隨時(shí)間的變化情況，構(gòu)建細(xì)胞譜系發(fā)育,，但這里的時(shí)間并不是真時(shí)間,，而是一個(gè)虛擬的時(shí)間，是指的細(xì)胞與細(xì)胞之間的轉(zhuǎn)化和演替的順序和軌跡,。即使在同一個(gè)樣本中,，也會(huì)存在多種不同的細(xì)胞形態(tài)。因此,，不論測(cè)定了多少樣本,，我們都可以采用擬時(shí)序分析對(duì)樣本中的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和變化進(jìn)行描述。單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序可識(shí)別重要的轉(zhuǎn)錄因子,，進(jìn)行譜系和發(fā)育追蹤,。

Single Cell Sequencing技術(shù)，即利用優(yōu)化后的高通量測(cè)序技術(shù)（NGS,，Next Generation Sequencing）分析每一個(gè)單個(gè)細(xì)胞的序列信息,，從而更高分辨率地揭示細(xì)胞間的細(xì)胞差異以及其在微環(huán)境中的功能情況。那么問題來了,，如何獲得單個(gè)細(xì)胞,？如果無法獲得單個(gè)細(xì)胞這一切都是不成立的；如何獲得大批量的單個(gè)細(xì)胞,？單個(gè)組織細(xì)胞群體通常在百萬級(jí)別以上,，如果被檢測(cè)的測(cè)序細(xì)胞數(shù)量過小精確度不足；如何低成本地獲得大批量單個(gè)細(xì)胞,？單細(xì)胞測(cè)序成本非常高,，尤其是需要測(cè)2000~3000個(gè)以上的細(xì)胞的時(shí)候，如果單個(gè)細(xì)胞的分選成本也很高,，技術(shù)根本無法普及,。所以,，正因?yàn)檫@些問題的存在使得高通量測(cè)序在單個(gè)細(xì)胞測(cè)序應(yīng)用中的普及度一直不足，直到幾個(gè)單細(xì)胞測(cè)序突破性技術(shù)的誕生,。烈冰科技成立10余年,，為科研學(xué)者提供專注的測(cè)序數(shù)據(jù)分析服務(wù)。上海single cell 單細(xì)胞測(cè)序

烈冰一站式單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)：立足科學(xué)研究,，解碼生命本質(zhì),。蘇州BD單細(xì)胞平臺(tái)

由于高通量測(cè)序?qū)嶒?yàn)方法相關(guān)的測(cè)序成本，使得單細(xì)胞實(shí)驗(yàn)往往非常昂貴,，烈冰生物BD Rhapsody單細(xì)胞測(cè)序服務(wù)珍視您的每一份樣本,，在平臺(tái)搭建前，我們測(cè)試評(píng)估了BD Rhapsody的性能,，與BD官方公布的數(shù)據(jù)結(jié)合來看,，將人293T和小鼠NIH/3T3細(xì)胞的1:1混合物以不同濃度上樣到BD Rhapsody卡式芯片上。存儲(chǔ)的cDNA分子普遍擴(kuò)增并進(jìn)行低通量測(cè)序（每個(gè)細(xì)胞月8700個(gè)讀數(shù)）,。在測(cè)序數(shù)據(jù)中檢測(cè)到1109個(gè)細(xì)胞的上樣條件下，每個(gè)細(xì)胞中,，來自每個(gè)細(xì)胞的平均99.4%的分子經(jīng)檢測(cè)為人或小鼠,，這表明微孔之間的串?dāng)_非常小，在測(cè)序數(shù)據(jù)中檢測(cè)到1000個(gè)或更少細(xì)胞的上樣密度下,，多重態(tài)發(fā)生率接近零,，并且在15000個(gè)細(xì)胞下小于5%。蘇州BD單細(xì)胞平臺(tái)

上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司專注技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品研發(fā),，發(fā)展規(guī)模團(tuán)隊(duì)不斷壯大,。公司目前擁有較多的高技術(shù)人才，以不斷增強(qiáng)企業(yè)重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力,，加快企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新,，實(shí)現(xiàn)穩(wěn)健生產(chǎn)經(jīng)營。上海烈冰生物醫(yī)藥科技有限公司主營業(yè)務(wù)涵蓋單細(xì)胞測(cè)序,，生物大數(shù)據(jù)云分析平臺(tái),，空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序,，堅(jiān)持“質(zhì)量保證,、良好服務(wù)、顧客滿意”的質(zhì)量方針,，贏得廣大客戶的支持和信賴,。公司深耕單細(xì)胞測(cè)序，生物大數(shù)據(jù)云分析平臺(tái),，空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,，單細(xì)胞多組學(xué)測(cè)序，正積蓄著更大的能量，向更廣闊的空間,、更寬泛的領(lǐng)域拓展,。