DNA甲基化（DNA methylation）是指在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶（DNMT）催化下,，以S-腺苷甲硫氨酸為甲基供體，將活性甲基轉(zhuǎn)移至DNA鏈中特定堿基上的化學(xué)修飾過程,。哺乳動(dòng)物基因組中,，DNA甲基化多發(fā)生在CpG二核苷酸中的胞嘧啶的5位碳原子。DNA甲基化是一種表觀（epigenetic）修飾,，它在不改變DNA序列的情況下,，對(duì)個(gè)體的生長(zhǎng)、發(fā)育,、基因表達(dá)模式以及基因組的穩(wěn)定性起到重要的調(diào)控作用,，并且這種修飾在發(fā)育和細(xì)胞增殖的過程中是可以穩(wěn)定傳遞的。近年來的大量研究表明,，DNA異常甲基化與**的發(fā)生,、發(fā)展、細(xì)胞*變有著密切的聯(lián)系,。WGBS技術(shù)及應(yīng)用是有力方案,。江蘇WGBSDNA甲基化怎么樣

作為比較高性價(jià)比的甲基化研究方法,，RRBS在大規(guī)模臨床樣本的研究中具有***的應(yīng)用。技術(shù)優(yōu)勢(shì)：從項(xiàng)目背景了解,、協(xié)助方案設(shè)計(jì),、實(shí)驗(yàn)材料選取、建庫(kù)測(cè)序,，到數(shù)據(jù)分析,，每個(gè)項(xiàng)目有特定的科學(xué)問題；需要專業(yè),、有價(jià)值的建議,；科學(xué)、縝密的設(shè)計(jì),；及時(shí)高效的溝通,；以保障高質(zhì)量研究成果。分析包括：測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量評(píng)估,，與參考基因組比對(duì),，酶切效率分析，甲基化位點(diǎn)Calling,，甲基化圖譜分析,，樣本見間甲基化水平比較分析，多樣本分析,，多組學(xué)整合分析,。山東RRBSDNA甲基化口碑推薦WGBS和RRBS都是金標(biāo)準(zhǔn)技術(shù), CNS發(fā)表文章都很多，廣發(fā)被接受,。

熒光定量法（Methylight）：這種技術(shù)是在MSP技術(shù)上發(fā)展起來的,，在MSP擴(kuò)增過程中利用熒光染料進(jìn)行定量。TaqMan?探針法的應(yīng)用使得該技術(shù)具有更高的精確性,。其原理與SNP檢測(cè)類似,，針對(duì)亞硫酸氫鹽處理之后的DN**段，在甲基化位點(diǎn)上會(huì)存在單堿基的差異,，根據(jù)這種差異進(jìn)行探針設(shè)計(jì),，隨后進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR，就能夠檢測(cè)甲基化的差異,。這種方法**的優(yōu)勢(shì)在于其高敏感性和較高通量,，且無(wú)需在PCR后電泳、雜交等操作,，減少了污染和操作誤差,。但是TaqMan?探針訂購(gòu)費(fèi)用較高，適用于少數(shù)位點(diǎn)大量樣本篩選,。

DNA修復(fù)基因高甲基化：DNA錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)（mismatchrepairsystem,MMR）是在人類細(xì)胞中存在的一種修復(fù)DNA堿基錯(cuò)配的自身保障體系,，由一系列特異修復(fù)DNA錯(cuò)配的酶組成,，它不同于其它抑制基因?qū)?xì)胞的無(wú)序增長(zhǎng)具有直接的作用，而是通過修復(fù)DNA復(fù)制過程中產(chǎn)生的錯(cuò)誤,，維持基因組的穩(wěn)定性,，避免突變，間接抑制**的發(fā)生,。目前已發(fā)現(xiàn)人類的MMR系統(tǒng)含有9個(gè)錯(cuò)配修復(fù)基因,，其中以hMLH1和hMSH2功能**為重要。MMR基因保證了DNA復(fù)制的高度保真,，一旦MMR基因發(fā)生突變或啟動(dòng)子甲基化引起錯(cuò)配修復(fù)基因失活,，導(dǎo)致機(jī)體錯(cuò)配修復(fù)功能的降低，進(jìn)而導(dǎo)致整個(gè)基因組的不穩(wěn)定,，從而使某些*基因和抑*基因的突變?cè)隗w內(nèi)得到快速聚集,，**由此發(fā)生，表現(xiàn)為**細(xì)胞的DNA多為二倍體或近二倍體的含量,。MMR基因啟動(dòng)子高甲基化在結(jié)直腸*,、胃*、腦膠質(zhì)瘤等**細(xì)胞中均有報(bào)道,。甲基化驗(yàn)證方案是TBS,。

Sequenom MassArray甲基化檢測(cè)：將待測(cè)DNA經(jīng)過亞硫酸鹽處理，通過PCR擴(kuò)增過程引入T7啟動(dòng)子序列,，經(jīng)T7 DNA聚合酶的體外轉(zhuǎn)錄過程得到各樣本RNA產(chǎn)物,，經(jīng)堿基特異性酶切處理，得到RNA小片段,，并用飛行質(zhì)譜檢測(cè)每個(gè)片段的分子量,，***EpiTYPER程序完成數(shù)據(jù)的自動(dòng)化處理并報(bào)告每個(gè)檢測(cè)片段的甲基化程度。技術(shù)優(yōu)勢(shì)：·檢測(cè)片段長(zhǎng)：擴(kuò)增片段長(zhǎng)度可達(dá)500bp·高靈敏度：可發(fā)現(xiàn)低至5%甲基化水平,，樣本起始量低至10ng?！ぶ貜?fù)性好：變異系數(shù)CV≤5%,。·高性價(jià)比：用384孔板進(jìn)行PCR反應(yīng),，一個(gè)擴(kuò)增產(chǎn)物可以進(jìn)行多重CpG位點(diǎn)分析,，無(wú)需后續(xù)驗(yàn)證，可直接用于文章發(fā)表,。5hmc是發(fā)現(xiàn)的一種修飾堿基,，成為哺乳動(dòng)物的“第六堿基”。江蘇WGBSDNA甲基化怎么樣

在正常組織里, 70%到90%散在的CpG是被甲基修飾的,。江蘇WGBSDNA甲基化怎么樣

相比于上述手段更為有效的策略是針對(duì)**相關(guān)*基因啟動(dòng)子低甲基化而進(jìn)行的靶向甲基化***,，包括DNA和RNA介導(dǎo)的甲基化***,。1）DNA介導(dǎo)的DNA甲基化：DNMT1**適底物為帶復(fù)制叉樣結(jié)構(gòu)的半甲基化DNA，據(jù)此Yao等設(shè)計(jì)了一段22nt的甲基化脫氧寡核苷酸MON1,，MON1可以誘導(dǎo)IGF2啟動(dòng)子區(qū)域特定的胞嘧啶發(fā)生甲基化,，體外實(shí)驗(yàn)證明其可抑制裸鼠肝臟**細(xì)胞生長(zhǎng)，延長(zhǎng)荷裸鼠存活期,。2）RNA介導(dǎo)的DNA甲基化：雙鏈RNA可以介導(dǎo)啟動(dòng)子區(qū)域DNA甲基化,，從而抑制基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。針對(duì)*基因啟動(dòng)子區(qū)域人工設(shè)計(jì)一段雙鏈RNA分子,，便可招募DNMT轉(zhuǎn)移甲基使*基因沉默,，抑制**細(xì)胞增殖，這一機(jī)制在乳腺*病例中已得到驗(yàn)證,。另外,，還可以通過人工介導(dǎo)上調(diào)DNMT或抑制DNA去甲基化酶實(shí)現(xiàn)**的甲基化***。目前,，針對(duì)**的甲基化***出現(xiàn)不久,，但已展現(xiàn)出良好的應(yīng)用前景，針對(duì)這一領(lǐng)域的深入研究有望為臨床預(yù)防和***提供高效低毒的抗**藥物,。江蘇WGBSDNA甲基化怎么樣