數(shù)字PCR可以直接計算目標(biāo)序列的拷貝數(shù),，因此無需依賴于對照樣品和標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以進(jìn)行精確的***定量檢測,；此外，由于數(shù)字PCR在進(jìn)行結(jié)果判讀時*判斷有/無兩種擴(kuò)增狀態(tài),，因此也不需要檢測熒光信號與設(shè)定閾值線的交點，完全不依賴于Ct值的鑒定，因此數(shù)字PCR的反應(yīng)受擴(kuò)增效率的影響**降低,，對PCR反應(yīng)抑制物的耐受能力**提高；數(shù)字PCR實驗中標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系分配的過程可以極大程度上降低與目標(biāo)序列有競爭性作用的背景序列濃度,，因此數(shù)字PCR技術(shù)也特別適合在復(fù)雜背景中檢測稀有突變,。轉(zhuǎn)基因食品或成分的檢測,。浙江核酸拷貝數(shù)定量數(shù)字PCR

ddPCR主要有Bio-rad公司開發(fā)的QX200系統(tǒng)和Rain Drop系統(tǒng)，QX200可以將體系分割成2萬個微滴,，Rain Drop可以分割成100萬-1 000萬個微滴,。ddPCR原理是通過將一個待分析的PCR反應(yīng)體系進(jìn)行微滴化處理，利用微滴發(fā)生器制成近20 000個油包水小微滴從而對原始體系進(jìn)行分割,，樣品中的核酸分子隨機(jī)分配到大量**的微滴中,，每個微滴中含有一個或不含待檢核酸分子。對微滴體系進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)以后,，分析每個微滴的熒光信號,，進(jìn)行有或無的判斷，將判斷結(jié)果按照泊松分布的原理,，通過讀取靶標(biāo)和內(nèi)參核酸的陽性微滴個數(shù)以及比例從而得到靶分子的拷貝數(shù)及濃度,。與芯片式dPCR相比，操作簡單,，可以實現(xiàn)高通量的檢測,，也保證一定程度上的微滴檢測穩(wěn)定性。廣東高靈敏度數(shù)字PCR共同合作可以用于白血病融合基因檢測,。

數(shù)字PCR（Digital PCR-dPCR）技術(shù)是一種新的核酸檢測和定量方法,，與傳統(tǒng)定量PCR（qPCR）技術(shù)不同，數(shù)字PCR采用***定量的方式,，不依賴于標(biāo)準(zhǔn)曲線和參照樣本,，直接檢測目標(biāo)序列的拷貝數(shù)。由于這種檢測方式具有比傳統(tǒng)qPCR更加出色的靈敏度和特異性,、精確性,，dPCR迅速得到***的應(yīng)用，這項技術(shù)在極微量核酸樣本檢測,、復(fù)雜背景下稀有突變檢測和表達(dá)量微小差異鑒定方面變現(xiàn)出的優(yōu)勢已被普遍認(rèn)可,，而其在基因表達(dá)研究、microRNA研究,、基因組拷貝數(shù)鑒定,、**標(biāo)志物稀有突變檢測、致病微生物鑒定,、轉(zhuǎn)基因成分鑒定,、NGS測序文庫精確定量和結(jié)果驗證等諸多方面具有的廣闊應(yīng)用前景已經(jīng)受到越來越多的關(guān)注。

該技術(shù)提出至今雖然只有十幾年時間,，但是由于其獨(dú)特的技術(shù)優(yōu)勢和應(yīng)用前景,，使得其產(chǎn)業(yè)化發(fā)展相當(dāng)迅速。迄今為止，已有包括Fluidigm和 Bio-Rad等幾家公司相繼推出了數(shù)字 PCR 產(chǎn)品,，并已經(jīng)應(yīng)用于單細(xì)胞分析,、**早期診斷和產(chǎn)前診斷等研究領(lǐng)域。目前,，有關(guān)數(shù)字 PCR 技術(shù)的綜述類文獻(xiàn)并不多見,，本文將在現(xiàn)有文獻(xiàn)基礎(chǔ)上，對該技術(shù)的原理,、定量方法,、分類及應(yīng)用進(jìn)行評述,，并對發(fā)展趨勢進(jìn)行展望,。數(shù)字 PCR 技術(shù)提出至今，相關(guān)技術(shù)和產(chǎn)業(yè)化發(fā)展都非常迅速,。迄今為止,，數(shù)字 PCR 技術(shù)主要有三類: 微反應(yīng)室/孔板、大規(guī)模集成微流控芯片和液滴數(shù)字PCR系統(tǒng),。DNA聚合酶對實驗的準(zhǔn)確性起著至關(guān)重要的作用,。

從上世紀(jì)90年代以來qPCR技術(shù)的爆發(fā)式發(fā)展使得現(xiàn)代核酸檢測技術(shù)具有全新的面貌，而進(jìn)入二十一世紀(jì)之后,，速度更快,、通量更高。成本更低的DNA測序技術(shù)正在迅速發(fā)展,，也是目前競爭**為激烈的研究領(lǐng)域之一,，即使在這種情況下，dPCR技術(shù)仍然以其高度的靈敏性和特異性在諸多科學(xué)領(lǐng)域爭取到屬于自己的一席之地,。即使在一些傳統(tǒng)的qPCR應(yīng)用領(lǐng)域,，也有一些實驗室同時選擇dPCR平臺進(jìn)行平行實驗以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確和可重復(fù)性。在基因組變異研究領(lǐng)域,，群體基因組水平上的SNP（Single Nucleotide Polymorphism,，單核苷酸多態(tài)性）檢測面臨的問題主要是突變序列往往與大量正常序列同時存在，競爭性反應(yīng)嚴(yán)重影響突變序列的檢測精度,，數(shù)字PCR技術(shù)帶來的極高的擴(kuò)增特異性在稀有突變檢測方面具有天然的優(yōu)勢,，在**標(biāo)志物檢測、無創(chuàng)產(chǎn)前檢查,、線粒體突變檢測等研究方向上,，我們已經(jīng)看到dPCR的許多精彩表現(xiàn)。近年來,，Bio-Rad,、凱杰、賽默飛等巨頭公司紛紛通過收購、投資等方式布局?jǐn)?shù)字PCR業(yè)務(wù),。浙江數(shù)字PCR數(shù)字PCR服務(wù)

提取外泌體也是個非常費(fèi)時費(fèi)錢的事情,。浙江核酸拷貝數(shù)定量數(shù)字PCR

拷貝數(shù)變異(CNV)研究：數(shù)字PCR直接讀取陽性信號，通過泊松分布校正得到目標(biāo)基因的***拷貝數(shù),，為拷貝數(shù)變異的研究提供了***的檢測精度,。采用數(shù)字PCR能夠有效對二代測序（NGS）和微陣列比較基因組雜交（aCGH）等實驗結(jié)果進(jìn)行驗證，并具有檢測周期短,、成本低,、樣本通量高等特點。低豐度DNA模板分子的精確定量：由于絕大部分微液滴中只含單個或不含模板分子,，使得低豐度DNA模板分子的擴(kuò)增不受高豐度模板分子擴(kuò)增的競爭抑制：與此同時,，樣品中可能存在的抑制劑也在分配到微液滴的過程中進(jìn)行了相對稀釋，作用于單個微液滴內(nèi)模板擴(kuò)增的抑制劑數(shù)量大幅降低,，從而提高PCR擴(kuò)增對抑制劑的耐受程度,，因此可應(yīng)用于諸多臨床樣品（如血液、尿液,、糞便,、痰液、胸腹水,、腦脊液等）中痕量核酸標(biāo)記物的檢測,。一般而言，定量PCR的檢測靈敏度約在1%,，NGS的靈敏度可達(dá)到1%,，而數(shù)字PCR的檢測下限可輕松實現(xiàn)0.01%。浙江核酸拷貝數(shù)定量數(shù)字PCR