瞬時轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞：轉(zhuǎn)染前一晚,，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）,。調(diào)整細胞濃度,，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）,。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時,，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基,，替換成無血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。PEI轉(zhuǎn)染試劑主要用于大規(guī)模的蛋白表達和病毒包裝。MirusPEI轉(zhuǎn)染試劑價格

轉(zhuǎn)染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染3h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。4.孵育細胞和分析結(jié)果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測,。轉(zhuǎn)染后快7h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。5.轉(zhuǎn)染24h后,，將細胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細胞稀釋10倍以上）,，在CO2培養(yǎng)箱中37℃孵育過一晚。第二天加入與轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的篩選藥物,。約1~2周可篩選到耐藥性克隆,，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。MirusPEI轉(zhuǎn)染試劑價格有誰用過40K的PEI轉(zhuǎn)染試劑？

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞：轉(zhuǎn)染前一晚,，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度,，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,，每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后,，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管,，例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,，去除生長培養(yǎng)基,，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞：轉(zhuǎn)染前,，用胰酶消化細胞并計數(shù),。調(diào)整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,，總體積如表1所示,，每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）,。充分混勻后,，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時,，請用圓底聚丙烯管,，例如Falcon5mL/14mL離心管。配制PEI轉(zhuǎn)染試劑的注意事項有哪些,？

瞬時轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞：轉(zhuǎn)染前一晚,，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細胞濃度,，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,，每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）,。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時,，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基,，替換成無血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。4.孵育細胞和分析結(jié)果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達,。請自行確定適合檢測時間,。有誰了解PEI轉(zhuǎn)染試劑？MirusPEI轉(zhuǎn)染試劑廠家

PEI轉(zhuǎn)染試劑包裝病毒的滴度有多高,？MirusPEI轉(zhuǎn)染試劑價格

注意事項質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒）,。通過260nm光吸收測定DNA濃度,，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能,，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性,。細胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌,、或支原體污染,。如果細胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次,。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞,。MirusPEI轉(zhuǎn)染試劑價格

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