特別提醒1.對(duì)于某些類型的細(xì)胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞,,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當(dāng)降低鋪板密度,,以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%,。2.對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞,可適當(dāng)降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無(wú)蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無(wú)蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化,。
哪個(gè)品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑比較好用?血清兼容PEI轉(zhuǎn)染試劑運(yùn)輸方式
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法:1.接種細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細(xì)胞濃度,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,,每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比,,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請(qǐng)勿顛倒添加順序),。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時(shí),,請(qǐng)用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基,,替換成無(wú)血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。
Thermo FisherPEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率哪款PEI轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染效率高呢?
對(duì)于某些類型的細(xì)胞如HEK-293,、HEK293T,、NIH/3T3和COS細(xì)胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,,可適當(dāng)降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%,。2.對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞,,可適當(dāng)降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無(wú)蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無(wú)蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。
上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司成立于2019年,,依托于集團(tuán)公司泉心泉意深厚的資源和超過(guò)400家國(guó)內(nèi)客戶群體,生命科學(xué)領(lǐng)域一站式供應(yīng)鏈體系,,以及高風(fēng)險(xiǎn)生物危險(xiǎn)材料進(jìn)出口平臺(tái)的優(yōu)勢(shì),,曼博生物嚴(yán)格篩選國(guó)際創(chuàng)新且經(jīng)過(guò)同行驗(yàn)證過(guò)的產(chǎn)品和技術(shù),引入中國(guó)市場(chǎng),,開(kāi)發(fā),、孵育和推廣,致力于將全球創(chuàng)新產(chǎn)品和前沿技術(shù)帶入中國(guó),,集中在為細(xì)胞/基因領(lǐng)域、/免疫,,抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品,,包括從Researchgrade到cGMP等級(jí)的無(wú)動(dòng)物源培養(yǎng)基質(zhì),轉(zhuǎn)染試劑,、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)試劑,、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務(wù),支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無(wú)縫轉(zhuǎn)化PEI轉(zhuǎn)染試劑的工作原理是什么呢,?
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法1.接種細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前,,用膠原酶消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細(xì)胞濃度,,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,,總體積如表1所示,每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請(qǐng)勿顛倒添加順序)。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時(shí),,請(qǐng)用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管,。更多關(guān)于Polysciences產(chǎn)品,,歡迎咨詢上海曼博生物!哪個(gè)品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑比較好,?cGMP級(jí)PEI轉(zhuǎn)染試劑用途
PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種高分子化學(xué)類轉(zhuǎn)染試劑,。血清兼容PEI轉(zhuǎn)染試劑運(yùn)輸方式
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上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司專注技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品研發(fā),,發(fā)展規(guī)模團(tuán)隊(duì)不斷壯大。目前我公司在職員工以90后為主,,是一個(gè)有活力有能力有創(chuàng)新精神的團(tuán)隊(duì),。公司業(yè)務(wù)范圍主要包括:血小板裂解液,WB自動(dòng)孵育系統(tǒng),,微流控器官芯片,,藍(lán)牙無(wú)線標(biāo)簽機(jī)等。公司奉行顧客至上,、質(zhì)量為本的經(jīng)營(yíng)宗旨,,深受客戶好評(píng)。公司憑著雄厚的技術(shù)力量,、飽滿的工作態(tài)度,、扎實(shí)的工作作風(fēng)、良好的職業(yè)道德,,樹(shù)立了良好的血小板裂解液,,WB自動(dòng)孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,,藍(lán)牙無(wú)線標(biāo)簽機(jī)形象,,贏得了社會(huì)各界的信任和認(rèn)可,。