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PEI轉(zhuǎn)染試劑運輸方式

來源: 發(fā)布時間:2023-03-11

細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,,用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%),。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染,。轉(zhuǎn)染前換入2mL預熱的無血清培養(yǎng)基,。2.制備PEI-DNA混合物:以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應總體積為例。準備兩支1.5mL離心管,,一管將質(zhì)粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,,混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,,充分混合,。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混勻后室溫靜置20-30min,。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中,,輕輕搖動平皿混勻,置于含5%~7%CO2的37℃溫箱孵育,。注:每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻,,保證所取的濃度一致。3.培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養(yǎng)基,,繼續(xù)培養(yǎng),,16h左右可以觀測到報告基因的表達。


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穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法:1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同),。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。


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材料:質(zhì)粒DNA指數(shù)生長的真核細胞PEI(聚乙烯亞胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI儲存液(100μM):稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,,0.2μm濾膜過濾,儲存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS(pH7.4):將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,,加入20ml1M的HEPES,,調(diào)pH值到7.4,定容至1L,,過濾(0.2μm濾膜)后儲存于4℃?zhèn)溆?。方法?.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%),。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預熱的無血清培養(yǎng)基,。


細胞轉(zhuǎn)染實驗是生物醫(yī)學實驗室中常規(guī)的研究手段,,目的是把外源基因,、蛋白或者小分子導入到靶細胞內(nèi)。目前主要有三種主流方法:生物轉(zhuǎn)染,,物理轉(zhuǎn)染和化學轉(zhuǎn)染,。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用病毒等微生物作為基因?qū)胼d體,以慢病毒,、腺病毒和腺相關(guān)病毒等常見,,其侵染效率可以達到90%以上,但常因安全性等問題,,很多實驗室對其敬而遠之,。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射、電穿孔和基因,,無論哪一種都需要特定的設備,,且一分錢一分貨,性能好的價格也都很性感,。更多Polysciences PEI相關(guān)產(chǎn)品內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司,!25K和40K的PEI轉(zhuǎn)染試劑有哪些區(qū)別?

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線性化聚乙烯亞胺pei25,000,一種高電荷陽離子聚合物,非常容易結(jié)合于高電荷陰離子基質(zhì),。工業(yè)應用上線性化pei可改善負電荷染料的物理外觀以調(diào)整染料的化學特性和增強染料與固相基質(zhì)的黏附能力,常用作黏附增強劑,作用同多聚賴氨酸(poly-lysine);科研應用上;線性化pei能與dna或其他負電荷生物大分子簡單結(jié)合,正是這一特性,使得成為一種非常行之有效的載體運輸介質(zhì)(vector carrier),即轉(zhuǎn)染試劑,。上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司成立于2019年,依托于集團公司泉心泉意深厚的資源和超過400家國內(nèi)客戶群體,,生命科學領域一站式供應鏈體系,,以及高風險生物危險材料進出口平臺的優(yōu)勢。更多關(guān)于Polysciences PEI,,歡迎咨詢上海曼博生物,!用PEI轉(zhuǎn)染試劑時一般和DNA的比例是多少?PEI轉(zhuǎn)染試劑哪個品牌好

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打造一批以為依托的“互聯(lián)網(wǎng)+醫(yī)藥健康”協(xié)作平臺,。這定將給相關(guān)企業(yè),帶來非常大的發(fā)展機遇,。2019年醫(yī)藥健康新政頻出,,無論是醫(yī)藥研發(fā)企業(yè)還是生產(chǎn)企業(yè),都面臨了很多挑戰(zhàn),。新增內(nèi)容體現(xiàn)了我國醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)技術(shù)升級的方向,,有助于引導企業(yè)緊跟國際前沿技術(shù),加快開發(fā)具有國際競爭力的新產(chǎn)品,,提高產(chǎn)業(yè)化水平,。既是血小板裂解液,WB自動孵育系統(tǒng),,微流控器官芯片,,藍牙無線標簽機當前發(fā)展的重要方向,,也是我國重視中醫(yī)藥傳承與創(chuàng)新發(fā)展的重要體現(xiàn)。隨著西方健康服務理念的進入及國內(nèi)需求市場的飛速增長,,國內(nèi)以體檢為重點的有限責任公司得到了飛速發(fā)展,,尤其是近年來,健康服務機構(gòu)飛速發(fā)展,。盡管中國老年健康服務目前仍處于初始發(fā)展階段,,但近年來我國出臺了一些扶持政策,市場空間逐漸打開,。生物醫(yī)藥科技(人體干細胞,、基因診斷與zhiliao技術(shù)開發(fā)和應用除外)領域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、自有技術(shù)轉(zhuǎn)讓,,并提供相關(guān)的技術(shù)咨詢和技術(shù)服務,;計算機軟件的開發(fā)、設計,、制作(音像制品、電子出版物除外),、銷售自產(chǎn)產(chǎn)品,;實驗室試劑及耗材(藥品、危險品除外),、化工原料及產(chǎn)品(除危險化學品,、監(jiān)控化學品、煙花爆竹,、民用baozha物,、易制毒化學品)、儀器儀表,、機械設備,、電子設備、塑料制品,、玻璃制品,、辦公用品、電子產(chǎn)品的批發(fā),、進出口,、傭金代理(拍賣除外)?!疽婪毥?jīng)批準的項目,,經(jīng)相關(guān)部門批準后方可開展經(jīng)營活動】是我國國民經(jīng)濟重要組成部分之一,具有高產(chǎn)出,、高危險,、高技術(shù)密集型特點,,有很強的技術(shù)壁壘。而且對于保護和增進大家健康,、提高生活質(zhì)量,,為計劃生育、救災防疫,、**戰(zhàn)備以及促進經(jīng)濟發(fā)展和社會進步均具有十分重要的作用,。PEI轉(zhuǎn)染試劑運輸方式

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