細(xì)胞分盤：通過胰酶消化收集細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿,，使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90％）。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染,。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基,。2.制備PEI-DNA混合物：以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應(yīng)總體積為例。準(zhǔn)備兩支1.5mL離心管,，一管將質(zhì)粒DNA（總量2-8μg為佳）加入240μLHBS中,，混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲(chǔ)存液稀釋成10μM,，充分混合,。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中，充分混勻后室溫靜置20-30min,。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)基中,，輕輕搖動(dòng)平皿混勻，置于含5％～7％CO2的37℃溫箱孵育,。注：每次用100μM的PEI儲(chǔ)存液前都需要先將其充分混勻,，保證所取的濃度一致。3.培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預(yù)熱的含有血清的培養(yǎng)基,，繼續(xù)培養(yǎng),，16h左右可以觀測(cè)到報(bào)告基因的表達(dá),。

用PEI轉(zhuǎn)染試劑時(shí)出現(xiàn)沉淀什么原因？不同分子量PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測(cè)方法

對(duì)于某些類型的細(xì)胞如HEK-293,、HEK293T,、NIH/3T3和COS細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,，可適當(dāng)降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%,。2.對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞,，可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下,，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。

支鏈PEI轉(zhuǎn)染試劑授權(quán)代理商PEI轉(zhuǎn)染試劑時(shí)出現(xiàn)沉淀什么原因？

上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司始終致力于為客戶提供一站式生物醫(yī)藥科技服務(wù),，以創(chuàng)新和為價(jià)值理念,，通過自身研發(fā)團(tuán)隊(duì)，以及與國(guó)內(nèi)外專業(yè)科研團(tuán)隊(duì)強(qiáng)強(qiáng)聯(lián)合,，不斷創(chuàng)新,，為生命科學(xué)和醫(yī)藥研發(fā)行業(yè)提供產(chǎn)品和服務(wù)。生物醫(yī)學(xué)工程是綜合應(yīng)用生命科學(xué)與工程科學(xué)的原理和方法,，從工程學(xué)角度在分子,、細(xì)胞、組織,、乃至整個(gè)人體系統(tǒng)多層次認(rèn)識(shí)人體的結(jié)構(gòu),、功能和其他生命現(xiàn)象，研究用于防病,、治病,、人體功能輔助及衛(wèi)生保健的人工材料、制品,、裝置和系統(tǒng)技術(shù)的總稱,。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物！

特別提醒：

1.對(duì)于某些類型的細(xì)胞如HEK-293,、HEK293T,、NIH/3T3和COS細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,，可適當(dāng)降低鋪板密度,，以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%。2.對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞,，可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下,，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化,。 用PEI轉(zhuǎn)染時(shí)，一般和DNA的比例是多少呢,？

準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請(qǐng)勿顛倒添加順序）,。充分混勻后,，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時(shí),，請(qǐng)用圓底聚丙烯管，例如Falcon5mL/14mL離心管,。轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),，去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基,，替換成無血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染3h后,，添加?體積的包含30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。更多關(guān)于Polysciences產(chǎn)品,，歡迎咨詢上海曼博生物！用PEI轉(zhuǎn)染試劑時(shí),，一般和DNA的比例是多少呢,？即用型PEI轉(zhuǎn)染試劑配置方法

PEI轉(zhuǎn)染對(duì)復(fù)合物孵化的時(shí)間是有要求的，一般建議5-20分鐘之間,。不同分子量PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測(cè)方法

線性化聚乙烯亞胺pei25,000,一種高電荷陽離子聚合物,非常容易結(jié)合于高電荷陰離子基質(zhì),。工業(yè)應(yīng)用上線性化pei可改善負(fù)電荷染料的物理外觀以調(diào)整染料的化學(xué)特性和增強(qiáng)染料與固相基質(zhì)的黏附能力,常用作黏附增強(qiáng)劑,作用同多聚賴氨酸(poly-lysine);科研應(yīng)用上;線性化pei能與dna或其他負(fù)電荷生物大分子簡(jiǎn)單結(jié)合,正是這一特性,使得成為一種非常行之有效的載體運(yùn)輸介質(zhì)(vector carrier),即轉(zhuǎn)染試劑,。上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司成立于2019年，依托于集團(tuán)公司泉心泉意深厚的資源和超過400家國(guó)內(nèi)客戶群體,，生命科學(xué)領(lǐng)域一站式供應(yīng)鏈體系,，以及高風(fēng)險(xiǎn)生物危險(xiǎn)材料進(jìn)出口平臺(tái)的優(yōu)勢(shì),。更多關(guān)于Polysciences PEI，歡迎咨詢上海曼博生物,！不同分子量PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測(cè)方法

上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司是國(guó)內(nèi)一家多年來專注從事血小板裂解液,，WB自動(dòng)孵育系統(tǒng)，微流控器官芯片,，藍(lán)牙無線標(biāo)簽機(jī)的老牌企業(yè)。公司位于自由貿(mào)易試驗(yàn)區(qū)達(dá)爾文路16幢104室,，成立于2019-02-15,。公司的產(chǎn)品營(yíng)銷網(wǎng)絡(luò)遍布國(guó)內(nèi)各大市場(chǎng),。公司主要經(jīng)營(yíng)血小板裂解液，WB自動(dòng)孵育系統(tǒng),，微流控器官芯片，藍(lán)牙無線標(biāo)簽機(jī)等產(chǎn)品,，我們依托高素質(zhì)的技術(shù)人員和銷售隊(duì)伍,，本著誠(chéng)信經(jīng)營(yíng),、理解客戶需求為經(jīng)營(yíng)原則,，公司通過良好的信譽(yù)和周到的售前,、售后服務(wù)，贏得用戶的信賴和支持,。公司秉承以人為本,，科技創(chuàng)新,，市場(chǎng)先導(dǎo),，和諧共贏的理念,，建立一支由血小板裂解液,，WB自動(dòng)孵育系統(tǒng),，微流控器官芯片，藍(lán)牙無線標(biāo)簽機(jī)**組成的顧問團(tuán)隊(duì),，由經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員組成的研發(fā)和應(yīng)用團(tuán)隊(duì)。上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司依托多年來完善的服務(wù)經(jīng)驗(yàn),、良好的服務(wù)隊(duì)伍,、完善的服務(wù)網(wǎng)絡(luò)和強(qiáng)大的合作伙伴，目前已經(jīng)得到醫(yī)藥健康行業(yè)內(nèi)客戶認(rèn)可和支持,，并贏得長(zhǎng)期合作伙伴的信賴,。