準備DNA-PEI復合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后,，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管,，例如Falcon5mL/14mL離心管,。轉(zhuǎn)染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,，去除生長培養(yǎng)基,，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物,。轉(zhuǎn)染3h后,，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。

哪家有GMP等級的PEI轉(zhuǎn)染試劑,？PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染步驟

1.對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度,，以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下,，DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化,。

進口PEI轉(zhuǎn)染試劑蛋白產(chǎn)量用PEI轉(zhuǎn)染試劑時，一般和DNA的比例是多少,？

PEI在于可以應用于體內(nèi)試驗,。當初試驗經(jīng)費很有限，被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000,，選擇PEI,，以至于相當長的時間內(nèi)，轉(zhuǎn)染試驗都不順利,。下面是幾點關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點：1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書,，所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時，一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中,，順序不可錯,，輕微混勻，靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時,，一定要換液,！換含有FBS的完全培養(yǎng)液！因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選,，建議把血清濃度適當提高,。

瞬時轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞：轉(zhuǎn)染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）,。調(diào)整細胞濃度,，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后,，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基,，替換成無血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。4.孵育細胞和分析結(jié)果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達,。請自行確定適合檢測時間

PEI轉(zhuǎn)染試劑主要成分是什么,？

特別提醒1.對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T,、NIH/3T3和COS細胞,，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,，可適當降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,，可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下,，DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化,。

哪個品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率高呢？即用型PEI轉(zhuǎn)染試劑運輸方式

用PEI轉(zhuǎn)染時,，一般和DNA的比例是多少,？PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染步驟

特別提醒1.對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T,、NIH/3T3和COS細胞,，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,，可適當降低鋪板密度,，以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下,，DNA-PEI復合物仍能轉(zhuǎn)染細胞，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,，每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。 PolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染步驟

上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司坐落于自由貿(mào)易試驗區(qū)達爾文路16幢104室,，是集設計,、開發(fā)、生產(chǎn),、銷售,、售后服務于一體，醫(yī)藥健康的貿(mào)易型企業(yè),。公司在行業(yè)內(nèi)發(fā)展多年,，持續(xù)為用戶提供整套血小板裂解液，WB自動孵育系統(tǒng),，微流控器官芯片,，藍牙無線標簽機的解決方案。公司主要產(chǎn)品有血小板裂解液,，WB自動孵育系統(tǒng),，微流控器官芯片，藍牙無線標簽機等,，公司工程技術(shù)人員,、行政管理人員、產(chǎn)品制造及售后服務人員均有多年行業(yè)經(jīng)驗,。并與上下游企業(yè)保持密切的合作關(guān)系,。依托成熟的產(chǎn)品資源和渠道資源，向全國生產(chǎn),、銷售血小板裂解液,，WB自動孵育系統(tǒng)，微流控器官芯片,，藍牙無線標簽機產(chǎn)品,，經(jīng)過多年的沉淀和發(fā)展已經(jīng)形成了科學的管理制度、豐富的產(chǎn)品類型,。上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司本著先做人,，后做事，誠信為本的態(tài)度，立志于為客戶提供血小板裂解液,，WB自動孵育系統(tǒng),，微流控器官芯片，藍牙無線標簽機行業(yè)解決方案,，節(jié)省客戶成本,。歡迎新老客戶來電咨詢。