接種細胞:轉(zhuǎn)染前,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。更多PEI相關(guān)產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物,!有哪些好的PEI轉(zhuǎn)染試劑品牌,?293細胞PEI轉(zhuǎn)染試劑價格
瞬時轉(zhuǎn)染方法:1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細胞和分析結(jié)果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測,。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達,。請自行確定適合檢測時間。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,!國產(chǎn)PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率PEI轉(zhuǎn)染試劑哪個品牌的比較好用?
接種細胞:轉(zhuǎn)染前,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。上海曼博生物是Polysciences官方授權(quán)du jia代理商,更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,!
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法:
1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%,。
2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同),。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管。
3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。
4.孵育細胞和分析結(jié)果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測,。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。
歡迎咨詢PEI產(chǎn)品,! PEI轉(zhuǎn)染試劑會不會產(chǎn)生毒性,?
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有誰用過40K的PEI轉(zhuǎn)染試劑?293細胞PEI轉(zhuǎn)染試劑價格
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