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CHO細(xì)胞PEI轉(zhuǎn)染試劑作用原理

來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-07-30

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法1.接種細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細(xì)胞濃度,,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時(shí),,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。4.孵育細(xì)胞和分析結(jié)果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá),。上海曼博生物是Polysciences官方授權(quán)du jia代理商,,更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題,歡迎咨詢上海曼博生物,!哪里可以買到GMP等級的PEI轉(zhuǎn)染試劑,?CHO細(xì)胞PEI轉(zhuǎn)染試劑作用原理

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對于某些類型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T,、NIH/3T3和COS細(xì)胞,,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,,可適當(dāng)降低鋪板密度,,以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細(xì)胞,,可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,!cGMP級PEI轉(zhuǎn)染試劑品牌比較哪個(gè)品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑比較好用?

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Polysciences是一家化學(xué)品制造公司,,產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于各個(gè)科研領(lǐng)域,。公司成立于1961年,起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案,,幫助科學(xué)家揭示未知領(lǐng)域,。隨后,,開拓了在病理(組織研究)應(yīng)用產(chǎn)品,使組織除了石蠟包埋外,,還能夠包埋在塑料塊中,;開發(fā)染料和染色劑,以實(shí)現(xiàn)更好的樣品觀測方式,。與government合作,,開發(fā)了用于診斷試劑盒應(yīng)的聚合物微球。與美國國家cancer中心合作,,開發(fā)天然產(chǎn)物分離和純化產(chǎn)品,,并用于紫杉醇的初步臨床試驗(yàn)。繼而開發(fā)出超順磁珠,,用于DNA,、蛋白質(zhì)和肽的研究。Polysciences的高純度單體和聚合物產(chǎn)品在醫(yī)療器械中有許多應(yīng)用,,并不斷開發(fā)和增強(qiáng)其性能,。近期業(yè)務(wù)擴(kuò)展到電子產(chǎn)品,Polysciences的精密微粒子產(chǎn)品拓展了納米技術(shù)應(yīng)用中測量精度,。公司秉承為應(yīng)用而研發(fā),,目前已擁有超過3000種產(chǎn)品。PolysciencesInc.致力于提供先進(jìn)的技術(shù),、制造能力和技術(shù)支持,,幫助客戶實(shí)現(xiàn)他們的目標(biāo)。上海曼博生物是Polysciences官方授權(quán)du jia代理商,,更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題,,歡迎咨詢上海曼博生物!

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上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司屬于醫(yī)藥健康的高新企業(yè),,技術(shù)力量雄厚。公司是一家有限責(zé)任公司企業(yè),,以誠信務(wù)實(shí)的創(chuàng)業(yè)精神,、專業(yè)的管理團(tuán)隊(duì)、踏實(shí)的職工隊(duì)伍,,努力為廣大用戶提供***的產(chǎn)品,。公司始終堅(jiān)持客戶需求優(yōu)先的原則,致力于提供高質(zhì)量的血小板裂解液,,WB自動孵育系統(tǒng),,微流控器官芯片,藍(lán)牙無線標(biāo)簽機(jī),。曼博生物將以真誠的服務(wù),、創(chuàng)新的理念、***的產(chǎn)品,,為彼此贏得全新的未來,!