基因zhi liao的臨床效果取決于細胞的高水平轉導,雖可通過二次轉導或提高gan ran復數(shù)(multiplicityofinfection,MOI)增加轉導率,但延長體外培養(yǎng)時間可誘導干細胞進入細胞周期而影響其分化增殖能力;提高gan ran復數(shù)會提高插入突變風險和增加生產(chǎn)成本,。因此,在不斷改造慢病毒以增加安全性的同時,提高病毒轉導效率是亟待解決的難題。慢病毒轉導過程的限制因素包括病毒黏附,、入胞、細胞運輸及固有免疫作用。通過引入異源病毒包膜構建新的偽型載體和/或在轉導過程中添加病毒轉導增強劑(transductionenhancers,TEs),可有效克服LVVs轉導的障礙,增加轉導細胞比例,從而達到臨床需要的轉導水平,。更多關于Sirion Biotech LentiBOOST慢病毒轉導增強劑,,歡迎咨詢上海曼博生物,!什么試劑可以增強慢病毒轉導的效率,?創(chuàng)新慢病毒轉導實驗技巧
影響轉導效率的另一個關鍵參數(shù)是gan ran復數(shù)(MOI),MOI指的是每個細胞gan ran的病毒粒子個數(shù),病毒粒子滴度以gan ran單位(IU)/mL 或 TU/mL表示,。慢病毒的gan ran能力隨細胞類型的不同而不同,因此每種不同的細胞類型需要不同的MOI,。MOI值越大,,慢病毒gan ran上的可能性也越大,gan ran效率越高,,但對細胞的毒性也越大,。另外細胞需要的MOI值越大,,也說明細胞越難被轉導。SIRION Biotech 為研究機構和醫(yī)院開發(fā)了一種定制的許可模式,,并為臨床試驗提供良好的 GMP 材料供應條件,。LentiBOOST 目前在美國和歐洲的多個臨床試驗中使用,。更多關于 Sirion Biotech LentiBOOST慢病毒轉導的相關產(chǎn)品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,!關于慢病毒轉導優(yōu)化方案慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達載體和慢病毒包裝載體組成,。
產(chǎn)品特點1.增強慢病毒轉導效率,,可高達90%—提高zhi liao蛋白表達量,,有利于取得臨床試驗成功2.減少MOI低至2倍,,從而降低COGS(Costofgoodssold)——減少Lentivirus的用量和物料成本3.控制單個細胞中的病毒載體拷貝數(shù)(VCN,VirusCopyNumber)——符合FDA/EMA對ATMPs(AdvancedTherapyMedicinalProducts)產(chǎn)品的安全標準4.易于使用——無需改變現(xiàn)有轉導流程,兼容已經(jīng)開發(fā)流程5.提供研究級和GMP級——GMP級具有臨床試驗的所有必備文件6.30多種應用LentiBOOST的藥物已在美國和歐洲進入臨床試驗(PhaseIII和PhaseI/II)階段——加速了IND文件歸檔
人間充質(zhì)干細胞 (MSCs) 的慢病毒轉導可誘導長期轉基因表達,并為多種基因zhi liao應用帶來巨大希望,。Polybrene是實驗室研究中Zui常用的提高病毒基因轉導效率的試劑,,但它未被批準用于人體,,并且還被證明會損害MSCs細胞的增殖和分化,。因此,,優(yōu)化轉導方案以應用于臨床試驗是非常有必要的。LentiBOOST 和硫酸魚精蛋白是可替代的轉導增強劑,,可以按照現(xiàn)行的GMP標準生產(chǎn),,且很容易應用于現(xiàn)有的轉導方案,并且曾被用于人類 CD34+ HSCs細胞的轉導研究,。聚凝胺(polybrene)是一種陽離子聚合物,1971年研究證明它可提高逆轉錄病毒的轉導效率,。polybrene的確切作用機制尚不清楚,多認為它是通過中和細胞表面與病毒粒子之間的負靜電斥力,使病毒粒子容易吸附在細胞表面,從而促進病毒轉導,。LentiBOOST是德國Sirion Biotech開發(fā)的一種高效、無細胞毒性的慢病毒轉導增強劑,,用于臨床前和臨床的慢病毒載體轉導。它是一種非離子型,、非受體依賴性的表面活性劑,,通過降低細胞膜粘稠度、提高脂質(zhì)交換和跨膜轉運,,促進慢病毒與細胞膜的融合,,提高轉導效率。慢病毒轉導是干什么的呢,?
在病毒附著到宿主細胞后,,病毒RNA滲透進宿主細胞,并以此為模板,,利用逆轉錄酶合成病毒cDNA,在逆轉錄和合成雙鏈DNA的過程中,,RNA的兩端都進行了復制,產(chǎn)生了長末端重復序列(LTRs),在雙鏈的病毒DNA中,,每條鏈含有U3-R-U5序列,,然后雙鏈DNA被運送到細胞核內(nèi)。新合成的逆轉錄病毒DNA整合到宿主DNA中,,稱為原病毒,。原病毒在細胞周期過程中復制,然后傳遞給子細胞,。不像其他逆轉錄病毒科成員,,慢病毒可以有效地gan ran不分裂的細胞,這使它們更有吸引力用于基因zhi liao,。更多關于Sirion Biotech LentiBOOST慢病毒轉導增強劑,,歡迎咨詢上海曼博生物!慢病毒轉染的載體是,?臨床慢病毒轉導服務
為了達到研究目的,在轉導過程中加入轉導增強劑也能有效提高轉導效率,。創(chuàng)新慢病毒轉導實驗技巧
慢病毒載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達目的序列的效果,。在ganran能力方面可有效地ganran神經(jīng)元細胞,、肝細胞、心肌細胞,、腫瘤細胞,、內(nèi)皮細胞、干細胞等多種類型的細胞,,從而達到良好的的基因zhiliao效果,。對于一些較難轉染的細胞,,如原代細胞、干細胞,、不分化的細胞等,,使用慢病毒載體,能dada提高目的基因的轉導效率,,且目的基因整合到宿主細胞基因組的幾率dada增加,,能夠比較方便快捷地實現(xiàn)目的基因的長期、穩(wěn)定表達,。更多關于SirionBiotechLentiBOOST慢病毒轉導增強劑,,歡迎咨詢上海曼博生物!創(chuàng)新慢病毒轉導實驗技巧