接種細胞:轉(zhuǎn)染前,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同),。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑,,歡迎咨詢上海曼博生物,!哪個品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染效率更好?RNAPEI轉(zhuǎn)染試劑品牌比較
上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司成立于2019年,,依托于集團公司泉心泉意深厚的資源和超過400家國內(nèi)客戶群體,,生命科學領(lǐng)域一站式供應鏈體系,以及高風險生物危險材料進出口平臺的優(yōu)勢,,曼博生物嚴格篩選國際創(chuàng)新且經(jīng)過同行驗證過的產(chǎn)品和技術(shù),,引入中國市場,開發(fā),、孵育和推廣,,致力于將全球創(chuàng)新產(chǎn)品和前沿技術(shù)帶入中國,集中在為細胞/基因領(lǐng)域,、/免疫,,抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品,包括從Researchgrade到cGMP等級的無動物源培養(yǎng)基質(zhì),,轉(zhuǎn)染試劑,、病毒轉(zhuǎn)導試劑、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務,,支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無縫轉(zhuǎn)化,。
上海曼博生物是Polysciences官方授權(quán)du jia代理商,,更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題,歡迎咨詢上海曼博生物,!Polysciences 是一家化學品制造公司,,產(chǎn)品廣泛應用于各個科研領(lǐng)域。公司成立于1961年,,起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案,,幫助科學家揭示未知領(lǐng)域。 科研級PEI轉(zhuǎn)染試劑配置方法有哪些比較好的轉(zhuǎn)染試劑呢?
線性PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽離子聚合物,,分子量25000,,它能與核酸形成復合物,并使該復合物進入哺乳動物細胞,。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣適用于常見細胞系,,如HEK-293、HEK293T,、HepG2,、Hela、CHO-K1,、COS-1,、COS-7、NIH/3T3和Sf9等,。該試劑即使在有血清存在的情況下,,它仍然能的將核酸導入細胞。78bio公司提供的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑具有如下優(yōu)點:優(yōu)越的轉(zhuǎn)染效率,重組蛋白的高表達水平,與含血清的培養(yǎng)基相兼容,低細胞毒性,易于操作?質(zhì)量控制每批次線性PEI轉(zhuǎn)染試劑均經(jīng)過轉(zhuǎn)染測試,。將eGFP表達質(zhì)粒(GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01)用EndoFectinTM-Plus轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)入亞融合狀態(tài)的HEK-293細胞,轉(zhuǎn)染16h后,,超過95%的細胞表達eGFP,。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品技術(shù)問題,歡迎咨詢上海曼博生物,。
瞬時轉(zhuǎn)染方法1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細胞量應能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。4.孵育細胞和分析結(jié)果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測,。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達。上海曼博生物是Polysciences官方授權(quán)du jia代理商,,更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題,,歡迎咨詢上海曼博生物!哪個品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑比較好,?
Polysciences是一家化學品制造公司,,產(chǎn)品廣泛應用于各個科研領(lǐng)域。公司成立于1961年,,起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案,,幫助科學家揭示未知領(lǐng)域。隨后,,開拓了在病理(組織研究)應用產(chǎn)品,,使組織除了石蠟包埋外,還能夠包埋在塑料塊中,;開發(fā)染料和染色劑,,以實現(xiàn)更好的樣品觀測方式。與government合作,,開發(fā)了用于診斷試劑盒應的聚合物微球,。與美國國家cancer中心合作,開發(fā)天然產(chǎn)物分離和純化產(chǎn)品,,并用于紫杉醇的初步臨床試驗,。繼而開發(fā)出超順磁珠,用于DNA,、蛋白質(zhì)和肽的研究,。Polysciences的高純度單體和聚合物產(chǎn)品在醫(yī)療器械中有許多應用,,并不斷開發(fā)和增強其性能。近期業(yè)務擴展到電子產(chǎn)品,,Polysciences的精密微粒子產(chǎn)品拓展了納米技術(shù)應用中測量精度,。公司秉承為應用而研發(fā),目前已擁有超過3000種產(chǎn)品,。PolysciencesInc.致力于提供先進的技術(shù),、制造能力和技術(shù)支持,幫助客戶實現(xiàn)他們的目標,。細胞轉(zhuǎn)染實驗是生物醫(yī)學實驗室中常規(guī)的研究手段,,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導入到靶細胞內(nèi),。目前主要有三種主流方法:生物轉(zhuǎn)染,,物理轉(zhuǎn)染和化學轉(zhuǎn)染。PEI轉(zhuǎn)染試劑對復合物孵化的時間是有要求的,,一般建議5~20分鐘之間.SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑如何儲存
美國Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑怎么樣,?RNAPEI轉(zhuǎn)染試劑品牌比較
細胞轉(zhuǎn)染實驗是生物醫(yī)學實驗室中常規(guī)的研究手段,目的是把外源基因,、蛋白或者小分子導入到靶細胞內(nèi),。目前主要有三種主流方法:生物轉(zhuǎn)染,物理轉(zhuǎn)染和化學轉(zhuǎn)染,。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用病毒等微生物作為基因?qū)胼d體,,以慢病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒等常見,,其侵染效率可以達到90%以上,,但常因安全性等問題,很多實驗室對其敬而遠之,。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射,、電穿孔和基因,無論哪一種都需要特定的設(shè)備,,且一分錢一分貨,,性能好的價格也都很性感,。上海曼博生物是Polysciences官方授權(quán)du jia代理商,,更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題,歡迎咨詢上海曼博生物,!RNAPEI轉(zhuǎn)染試劑品牌比較