1.對于某些類型的細(xì)胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞,,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當(dāng)降低鋪板密度,,以確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細(xì)胞,,可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細(xì)胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化,。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品技術(shù)問題,歡迎咨詢上海曼博生物。也可關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,,查看更多技術(shù)文章,!Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑中國代理商是哪個?Thermo FisherPEI轉(zhuǎn)染試劑溶解度
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穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法:1.接種細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細(xì)胞濃度,,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同),。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。PEI轉(zhuǎn)染試劑不含動物源成分,。cGMP級PEI轉(zhuǎn)染試劑
PEI轉(zhuǎn)染試劑,,科學(xué)界的得力助手,加速基因功能研究步伐,。Thermo FisherPEI轉(zhuǎn)染試劑溶解度
化學(xué)轉(zhuǎn)染方法是生物醫(yī)學(xué)研究中常用的轉(zhuǎn)染方法,,主要包括兩類:陽離子脂質(zhì)體和陽離子聚合物。其基本原理是利用陽離子的化學(xué)分子與帶有負(fù)電荷的核酸通過正負(fù)電荷作用形成穩(wěn)定的復(fù)合物,。一方面使復(fù)合體整體帶上正電荷(多數(shù)細(xì)胞膜表面帶有弱的負(fù)電荷,,通過電荷作用吸引復(fù)合體到細(xì)胞膜表面);另一方面對線性的核酸進(jìn)行濃縮,,使其體積變小更易穿透細(xì)胞膜,。陽離子聚合物類轉(zhuǎn)染試劑可以說是貧窮實驗室的福音了。早在2012年就有研究小組在大名鼎鼎的Nature Protocol上發(fā)表了PEI作為轉(zhuǎn)染試劑的詳細(xì)方法,,到現(xiàn)在被越來越多的實驗室采用,。Thermo FisherPEI轉(zhuǎn)染試劑溶解度