慢病毒載體是一種源于人類免疫缺陷病毒的基因載體,,被guang fan用于真核細(xì)胞如造血干細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞的基因編輯。隨著對(duì)基因遞送工具長期深入的研究,,慢病毒作為基因載體已然guang fan用于基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)踐當(dāng)中。如在白血病的臨床zhi liao中,,慢病毒可以gan ranT細(xì)胞,,使其可以識(shí)別并且殺滅Zhong LiuB細(xì)胞;在地中海貧血的zhi liao中,,慢病毒可以將正常的β-珠蛋白基因序列送入造血干細(xì)胞中,,矯正貧血癥狀;它還在很多單基因遺傳病的zhi liao中發(fā)揮很大作用,。隨著后基因組時(shí)代的來臨,,基因zhi liao在醫(yī)學(xué)研究中所占比重越來越大。一些難以geng zhi或者緩解的傳統(tǒng)疾病可以通過基因zhi liao緩解甚至zhi yu,,慢病毒為未來基因zhi liao的發(fā)展提供了新的工具和方法,。用什么試劑可以做慢病毒轉(zhuǎn)染么?HSC細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)注意事項(xiàng)
慢病毒載體的研究發(fā)展得很快,研究的也非常深入,,在美國已經(jīng)開展了臨床研究,,效果非常理想,因此具有廣闊的應(yīng)用前景,。慢病毒也被guang fan地應(yīng)用于表達(dá)RNAi的研究中,。由于有些類型細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑瞬時(shí)轉(zhuǎn)染效果差,轉(zhuǎn)移到細(xì)胞內(nèi)的siRNA半衰期短,,體外合成siRNA對(duì)基因表達(dá)的抑制作用通常是短暫的,,因而使其應(yīng)用受到較大的限制。采用事先在體外構(gòu)建能夠表達(dá)siRNA的載體,,然后轉(zhuǎn)移到細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄siRNA的策略,,不但使脂質(zhì)體有效轉(zhuǎn)染的細(xì)胞種類增加,而且對(duì)基因表達(dá)抑制效果也不遜色于體外合成siRNA,,在長期穩(wěn)定表達(dá)載體的細(xì)胞中,,甚至可以發(fā)揮長期阻斷基因表達(dá)的作用。HSC細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)注意事項(xiàng)哪個(gè)牌子的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑比較好呢?
近幾年LentiBOOST作為一種無毒性的化學(xué)轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑guang fan引起關(guān)注,。LentiBOOST通過與細(xì)胞膜相互作用降低膜黏稠度,提高脂質(zhì)交換和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn),,提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。研究證實(shí)LentiBOOST在不影響轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞存活,、增殖及分化能力的前提下,,提高小鼠T細(xì)胞、HSCs和人HSCs的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,。在異種移植后免疫缺陷小鼠體內(nèi),,LentiBOOST使再植HSCs的VCN增加2倍,且對(duì)細(xì)胞分化和植入無影響,。LentiBOOST在對(duì)人T細(xì)胞無細(xì)胞毒作用的情況下可增強(qiáng)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生更多的Zhong Liu抗原特異性TCR-T細(xì)胞,,且轉(zhuǎn)導(dǎo)后的 T細(xì)胞仍能分泌TNF及IFN-γ,并對(duì)抗原陽性的腫瘤細(xì)胞具有明顯的細(xì)胞毒作用,,這一發(fā)現(xiàn)為ai zheng的基因zhi liao提供新的優(yōu)化策略,。更多關(guān)于LentiBOOST慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑相關(guān)產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物,!
目前,,CAR-T細(xì)胞主要通過病毒載體制備,大多數(shù)情況下由慢病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒做載體,。慢病毒載體(LVs)由于其有效的將基因整合進(jìn)靶細(xì)胞基因組,,穩(wěn)定的基因表達(dá)等特點(diǎn),被認(rèn)為是Zui有希望的基因zhi liao載體,。與其他病毒載體相比,,慢病毒載體的整合模式具有更低的致Ai風(fēng)險(xiǎn),以及隨機(jī)整合基因風(fēng)險(xiǎn)低,因此,,用慢病毒載體生產(chǎn)CAR-T細(xì)胞更加安全有效,,而且靈活。更重要的是慢病毒相較于其他病毒載體,,生產(chǎn)成本相對(duì)較低,。另外,慢病毒載體可以轉(zhuǎn)導(dǎo)分化細(xì)胞,,也可以轉(zhuǎn)導(dǎo)分化細(xì)胞,,因此,慢病毒載體可以轉(zhuǎn)導(dǎo)更為guang fan的細(xì)胞,,包括那些難轉(zhuǎn)導(dǎo)的血液前體細(xì)胞,,神經(jīng)細(xì)胞,淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。更多關(guān)于Revvity Gene Delivery GmbH(SIRION Biotech GmbH)慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑相關(guān)產(chǎn)品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物!哪個(gè)牌子的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑比較好?
研究發(fā)現(xiàn) LentiBOOST 和硫酸魚精蛋白的組合使用可以產(chǎn)生比polybrene更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率,,且對(duì)細(xì)胞活力或干細(xì)胞特性沒有劑量依賴性的不良影響,。這種轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑的組合dai biao了一種有價(jià)值的臨床兼容性polybrene替代方案,具有顯著提高基因zhi liao應(yīng)用中 MSCs 慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的潛力,。細(xì)胞狀態(tài)對(duì)于慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率也具有很大的影響,,良好的生長狀態(tài)是達(dá)到高gan ran效率的保證,一般選擇細(xì)胞形態(tài)較好,、輪廓清晰,、處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行g(shù)an ran可提高gan ran效率。更多關(guān)于Sirion Biotech LentiBOOST相關(guān)技術(shù)文章,,歡迎咨詢上海曼博生物,!也可關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的特點(diǎn)是什么?HSC細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)注意事項(xiàng)
什么試劑可以增加慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的速度?HSC細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)注意事項(xiàng)
人間充質(zhì)干細(xì)胞 (MSCs) 的慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)可誘導(dǎo)長期轉(zhuǎn)基因表達(dá),,并為多種基因zhi liao應(yīng)用帶來巨大希望,。Polybrene是實(shí)驗(yàn)室研究中Zui常用的提高病毒基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的試劑,但它未被批準(zhǔn)用于人體,,并且還被證明會(huì)損害MSCs細(xì)胞的增殖和分化。因此,,優(yōu)化轉(zhuǎn)導(dǎo)方案以應(yīng)用于臨床試驗(yàn)是非常有必要的,。LentiBOOST 和硫酸魚精蛋白是可替代的轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)劑,可以按照現(xiàn)行的GMP標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn),,且很容易應(yīng)用于現(xiàn)有的轉(zhuǎn)導(dǎo)方案,,并且曾被用于人類 CD34+ HSCs細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)研究。聚凝胺(polybrene)是一種陽離子聚合物,1971年研究證明它可提高逆轉(zhuǎn)錄病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。polybrene的確切作用機(jī)制尚不清楚,多認(rèn)為它是通過中和細(xì)胞表面與病毒粒子之間的負(fù)靜電斥力,使病毒粒子容易吸附在細(xì)胞表面,從而促進(jìn)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo),。更多關(guān)于LentiBOOST慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)產(chǎn)品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào)查看更多技術(shù)文章:Mine-bioHSC細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)注意事項(xiàng)