材料：質(zhì)粒DNA指數(shù)生長的真核細(xì)胞PEI（聚乙烯亞胺）1×HBS（pH7.4）配方：PEI儲存液（100μM）：稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS（pH7.4）中,，0.2μm濾膜過濾,，儲存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS（pH7.4）：將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,，加入20ml1M的HEPES,，調(diào)pH值到7.4，定容至1L,，過濾（0.2μm濾膜）后儲存于4℃?zhèn)溆谩７椒ǎ?．細(xì)胞分盤：通過胰酶消化收集細(xì)胞,，用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,，使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90％）。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染,。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基,。歡迎咨詢上海曼博生物。PEI轉(zhuǎn)染試劑的主要分子量是多少,？cGMP級PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理商

瞬時轉(zhuǎn)染方法：1.接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一晚,，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度,，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,，每個孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）,。充分混勻后,，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時,，請用圓底聚丙烯管,，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。4.孵育細(xì)胞和分析結(jié)果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測,。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。請自行確定適合檢測時間,。如想申請試用裝,，請關(guān)注公眾號：Mine-bio，回復(fù)“申請PEI”,，即可參加,！四川高性價比PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理PEI轉(zhuǎn)染試劑可以轉(zhuǎn)染哪些細(xì)胞？

瞬時轉(zhuǎn)染方法1.接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前,，用膠原酶消化細(xì)胞并計數(shù)（不建議用胰酶）,。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,，總體積如表1所示,，每個孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）,。充分混勻后,，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時,，請用圓底聚丙烯管,，例如Falcon5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染3h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。4.孵育細(xì)胞和分析結(jié)果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測,。轉(zhuǎn)染后快7h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。請自行確定檢測時間,。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物,！歡迎關(guān)注公眾號Mine-bio

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法：1.接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計數(shù)（不建議用胰酶）,。調(diào)整細(xì)胞濃度,，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）,。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時,，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基,，然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。近期還有PEIfree申請活動,，歡迎咨詢上海曼博生物！PEI轉(zhuǎn)染試劑的工作原理是什么,？

PEI在于可以應(yīng)用于體內(nèi)試驗,。當(dāng)初試驗經(jīng)費很有限，被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000,，選擇PEI,，以至于相當(dāng)長的時間內(nèi)，轉(zhuǎn)染試驗都不順利,。下面是幾點關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點：1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書,，所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時，一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中,，順序不可錯,，輕微混勻，靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時,，一定要換液,！換含有FBS的完全培養(yǎng)液！因為PEI對細(xì)胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選,，建議把血清濃度適當(dāng)提高,。PS：事實證明，PEI是可行的,，已經(jīng)做出穩(wěn)定細(xì)胞系了,。Polysciences轉(zhuǎn)染與遞送相關(guān)產(chǎn)品已正式移交KyforaBio，相關(guān)產(chǎn)品標(biāo)簽將變更為KyforaBiobyPolysciences,，后續(xù)購買請認(rèn)準(zhǔn)備新品牌,。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)的信息，可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司,！專為細(xì)胞實驗設(shè)計,，PEI轉(zhuǎn)染試劑提升基因表達(dá)效率。四川高性價比PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理

如何優(yōu)化PEI轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染時的比例,？cGMP級PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理商

對于某些類型的細(xì)胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,，可適當(dāng)降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細(xì)胞,，可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下,，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到宜轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細(xì)胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉(zhuǎn)染試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化,。更多產(chǎn)品信息，歡迎咨詢上海曼博生物,！cGMP級PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理商