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北京高質量PEI轉染試劑

來源: 發(fā)布時間:2025-05-01

PEI在于可以應用于體內試驗,。當初試驗經費很有限,被逼無奈只能放棄脂質體2000,選擇PEI,,以至于相當長的時間內,,轉染試驗都不順利,。下面是幾點關于PEI轉染的注意要點:1.PEI的使用量可以參照脂質體2000的說明書,,所用質粒盡量去內2.轉染時,一定要把PEI+DMEM加入到質粒+DMEM中,,順序不可錯,,輕微混勻,靜止20min3.轉染后4小時,,一定要換液,!換含有FBS的完全培養(yǎng)液!因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選,,建議把血清濃度適當提高,。PS:事實證明,PEI是可行的,,已經做出穩(wěn)定細胞系了,。Polysciences轉染與遞送相關產品已正式移交KyforaBio,相關產品標簽將變更為KyforaBiobyPolysciences,,后續(xù)購買請認準備新品牌,。更多關于PEI轉染試劑相關的信息,可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司,!PEI轉染試劑可以轉染哪些細胞呢,?北京高質量PEI轉染試劑

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PEIMAX——高產工業(yè)化轉染試劑-高度濃縮,可制備大量轉染試劑KyforaBiobyPolysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,,PEI)的產品,,因其較高的轉染效果,已廣泛應用于工業(yè)化生產,。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,,每相隔二個碳原子,即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子,,使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”(protonsponge)體,。PEI可用作轉染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞,。PEIMAX40K是由KyforaBiobyPolysciences出品的全合成線性聚乙烯亞胺瞬時轉染試劑,。PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑,大量科學家選擇PEIMAX,在內部自行制備低成本高效益的PEI轉染試劑,。多年以來,,經過眾多業(yè)內人士評審的公開研究和出版文獻表明,在HEK293,、CHO和Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉染效率,,在重組抗體和病毒載體生產中穩(wěn)定性高,可靠性強,。PEIMAX提供從96孔板到200L生物反應器持續(xù)的高基因表達細胞體系,實現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產的輕松過度,。而且與大多數(shù)細胞轉染方案相比,,使用PEIMAX至少可降低40%轉染成本(部分案例可降低90%轉染成本)。湖北垂直輪PEI轉染試劑PEI轉染試劑不含動物源成分,。

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瞬時轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。4.孵育細胞和分析結果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測。轉染后5h即可檢測到轉入基因的表達。請自行確定適合檢測時間,。更多關于PEI轉染試劑相關產品信息,,歡迎咨詢上海曼博生物!

穩(wěn)定轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物,。當溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管,。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后,,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。若想咨詢更多關于PEI轉染試劑相關信息,歡迎咨詢上海曼博生物,!為什么PEI轉染試劑配制的過程中要加酸,?

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1.對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T,、NIH/3T3和COS細胞,,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,,可適當降低鋪板密度,,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優(yōu)化。如有更多關于Polysciences PEI轉染試劑相關產品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,。無需昂貴設備,PEI試劑實現(xiàn)經濟高效率的基因轉染方案,。湖北垂直輪PEI轉染試劑

PEI轉染試劑主要包括25K和40K的分子量?北京高質量PEI轉染試劑

產品簡介Transporter5轉染試劑是一種非GMP等級的即用型線性聚乙烯亞胺(PEI轉染試劑)溶液,,由PEIMAX配置而成,,采用0.1umPES無菌過濾器,完全消除支原體污染風險,。Transporter5將DNA縮聚成帶正電荷的復合物,,這些復合物很容易通過內吞作用進入細胞,并且Transporter5-DNA復合物能很好地抵御溶酶體的降解作用,,有效提高轉染效率,。適用于工藝開發(fā)、臨床前和早期臨床研究,,可無縫過渡到MAXgeneGMP用于商業(yè)化生產,。Transporter5轉染試劑能高效地將DNA轉染入HEK-293、CHO,、COS,、HELA、昆蟲(SF9,、SF21)等真核細胞系,,可作用于大到135,000個核苷酸的質粒,所以較大的質粒也可以成功地轉染,。Transporter5可節(jié)省試劑準備時間,,加快項目進度。經過嚴格的性能檢測,,確保品質,,在新藥研發(fā)過程中是一款快速、重復性好、可用于批量產的轉染試劑,。北京高質量PEI轉染試劑