對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞,,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平,。如果選擇轉染前兩天鋪板,,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優(yōu)化,。Polysciences轉染與遞送相關產(chǎn)品已正式移交Kyfora Bio,,相關產(chǎn)品標簽將變更為Kyfora Bio by Polysciences,后續(xù)購買請認準備新品牌,。PEI轉染試劑使用的注意事項有哪些,?血清兼容PEI轉染試劑品牌
1.對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T,、NIH/3T3和COS細胞,,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優(yōu)化,。更多關于PEI轉染試劑相關產(chǎn)品技術問題,歡迎咨詢上海曼博生物,。也可關注我們的公眾號:Mine-bio,,查看更多技術文章!血清兼容PEI轉染試劑品牌PEI轉染試劑的穩(wěn)定性如何,?
瞬時轉染方法:1.接種細胞:轉染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA,、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉染時,,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復合物,。轉染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。4.孵育細胞和分析結果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測,。轉染后5h即可檢測到轉入基因的表達。請自行確定適合檢測時間,。如想申請試用裝,,請關注公眾號:Mine-bio,回復“申請PEI”,,即可參加,!
Transporter 5轉染試劑是一種非GMP等級的即用型線性聚乙烯亞胺(PEI轉染試劑)溶液,由PEI MAX配置而成,,采用0.1um PES無菌過濾器,,完全消除支原體污染風險。Transporter 5將DNA縮聚成帶正電荷的復合物,,這些復合物很容易通過內(nèi)吞作用進入細胞,,并且Transporter 5-DNA 復合物能很好地抵御溶酶體的降解作用,有效提高轉染效率,。適用于工藝開發(fā),、臨床前和早期臨床研究,可無縫過渡到MAXgene GMP用于商業(yè)化生產(chǎn),。Transporter 5轉染試劑能高效地將DNA轉染入HEK-293,、CHO、COS,、HELA,、昆蟲(SF9、SF21) 等真核細胞系,,可作用于大到135,000個核苷酸的質(zhì)粒,,所以較大的質(zhì)粒也可以成功地轉染,。 Transporter 5可節(jié)省試劑準備時間,加快項目進度,。經(jīng)過嚴格的性能檢測,,確保品質(zhì),在新藥研發(fā)過程中是一款快速,、重復性好,、可用于批量產(chǎn)的轉染試劑。產(chǎn)品特點:非GMP,,研究級PEI轉染試劑溶液,;高轉染效率;無縫過渡到MAXgene GMP,;易放大,,可預測產(chǎn)量;用于工藝開發(fā),,臨床前和早期臨床研究,。誰知道Polysciences的轉染試劑怎樣?
產(chǎn)品特點:PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),,是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級產(chǎn)品。相比于PEI25K,,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙?;?.鹽酸鹽形式,,具更高的水溶特性,;3.含更長連續(xù)性乙烯亞胺片段,其質(zhì)子化氮水平比PEI25K提高11%以上,。應用領域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級的PEI轉染試劑,,適用于基礎學術研究和藥物研發(fā)早期階段,以固體粉末形式提供,,需用戶自行配置(詳情見使用方法),。或者關注我們的公眾號:Mine-bio為什么PEI轉染試劑配制的過程中要加酸,?25KPEI轉染試劑殘留檢測方法
PEI轉染試劑如何溶解和配置,?血清兼容PEI轉染試劑品牌
PEIMAX——高產(chǎn)工業(yè)化轉染試劑-高度濃縮,可制備大量轉染試劑KyforaBiobyPolysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,,PEI)的產(chǎn)品,,因其較高的轉染效果,已廣泛應用于工業(yè)化生產(chǎn),。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,,每相隔二個碳原子,即每“第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡在任何pH下都能充當有效的“質(zhì)子海綿”(protonsponge)體,。PEI可用作轉染試劑,,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。PEIMAX40K是由KyforaBiobyPolysciences出品的全合成線性聚乙烯亞胺瞬時轉染試劑,。PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑,,大量科學家選擇PEIMAX,在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉染試劑,。多年以來,,經(jīng)過眾多業(yè)內(nèi)人士評審的公開研究和出版文獻表明,在HEK293,、CHO和Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉染效率,,在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性高,可靠性強,。PEIMAX提供從96孔板到200L生物反應器持續(xù)的高基因表達細胞體系,,實現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過度。而且與大多數(shù)細胞轉染方案相比,,使用PEIMAX至少可降低40%轉染成本(部分案例可降低90%轉染成本),。血清兼容PEI轉染試劑品牌