注意事項質(zhì)粒質(zhì)量:請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒),。通過260nm光吸收測定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)),。如有可能,,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細胞,。確保培養(yǎng)基沒有被細菌,、或支原體污染。如果細胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細胞,,請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次,。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。更多Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑等相關(guān)產(chǎn)品信息,,歡迎咨詢上海曼博生物,!近期還有PEI試用裝申請活動,可關(guān)注我們的公眾號:Mine-bioPEI轉(zhuǎn)染試劑有沒有毒性,?SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑
PEI在于可以應(yīng)用于體內(nèi)試驗,。當(dāng)初試驗經(jīng)費很有限,被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000,,選擇PEI,,以至于相當(dāng)長的時間內(nèi),,轉(zhuǎn)染試驗都不順利。下面是幾點關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點:1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書,,所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時,,一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中,順序不可錯,,輕微混勻,,靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時,一定要換液,!換含有FBS的完全培養(yǎng)液,!因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選,建議把血清濃度適當(dāng)提高,。PS:事實證明,,PEI是可行的,已經(jīng)做出穩(wěn)定細胞系了,。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)的信息,,可咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司!更多關(guān)于Kyfora Bio by Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題,,歡迎咨詢上海曼博生物,!湖北全球PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理哪里有賣GMP等級的PEI轉(zhuǎn)染試劑?
1.對于某些類型的細胞如HEK-293,、HEK293T,、NIH/3T3和COS細胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,,可適當(dāng)降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細胞的匯合度仍為70~80%,。2.對于接觸抑制敏感的細胞,,可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性,。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化,。如有更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物,。
PEIMAX粉末配置方法:1)將1gPEIMAX40K放入盛有900mL水的玻璃燒杯中,;2)放入攪拌轉(zhuǎn)子,,放置于磁力攪拌器上,設(shè)置攪拌程序以形成一個較小的漩渦,;3)等待PEIMAX40K完全溶解,,通常需要5分鐘左右;4)用25mL塑料移液管加入1N氫氧化鈉滴定至pH6.9~7.1,;5)如果不小心超過7.1,,則使用1N的鹽酸和新的塑料移液管將pH重新滴定至6.9~7.1;6)將溶液轉(zhuǎn)移到1L玻璃量筒中,,加入水定容至1L,;7)用無菌真空過濾膜過濾配制的轉(zhuǎn)染試劑溶液;8)按需分裝,,4°C儲存(切記不可冷凍),;注:未經(jīng)配制的粉末有效期為2年。配置成液體后分裝在合適的瓶子中,,并且保存在4℃的轉(zhuǎn)染試劑將可在6個月之內(nèi)保持性能,。如jin用于蛋白定性研究,分裝的轉(zhuǎn)染試劑可延長有效使用期至1年,。
如何辨別假的PEI轉(zhuǎn)染試劑,?
產(chǎn)品特點:PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級產(chǎn)品,。相比于PEI25K,,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙?;?;2.鹽酸鹽形式,具更高的水溶特性,;3.含更長連續(xù)性乙烯亞胺片段,,其質(zhì)子化氮水平比PEI25K提高11%以上。應(yīng)用領(lǐng)域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級的PEI轉(zhuǎn)染試劑,,適用于基礎(chǔ)學(xué)術(shù)研究和藥物研發(fā)早期階段,,以固體粉末形式提供,需用戶自行配置(詳情見使用方法),。更多關(guān)于KyforaBiobyPolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑,,歡迎咨詢上海曼博生物!PEI轉(zhuǎn)染試劑用什么溶劑配制,?陜西垂直輪PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理
PEI轉(zhuǎn)染試劑適用于針對293和CHO細胞的瞬時轉(zhuǎn)染,。SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑
產(chǎn)品簡介:Transporter5轉(zhuǎn)染試劑是一種非GMP等級的即用型線性聚乙烯亞胺(PEI轉(zhuǎn)染試劑)溶液,由PEIMAX配置而成,,采用0.1umPES無菌過濾器,,完全消除支原體污染風(fēng)險,。Transporter5將DNA縮聚成帶正電荷的復(fù)合物,這些復(fù)合物很容易通過內(nèi)吞作用進入細胞,,并且Transporter5-DNA復(fù)合物能很好地抵御溶酶體的降解作用,,有效提高轉(zhuǎn)染效率。適用于工藝開發(fā),、臨床前和早期臨床研究,,可無縫過渡到MAXgeneGMP用于商業(yè)化生產(chǎn)。Transporter5轉(zhuǎn)染試劑能高效地將DNA轉(zhuǎn)染入HEK-293,、CHO,、COS、HELA,、昆蟲(SF9,、SF21)等真核細胞系,可作用于大到135,000個核苷酸的質(zhì)粒,,所以較大的質(zhì)粒也可以成功地轉(zhuǎn)染,。Transporter5可節(jié)省試劑準備時間,加快項目進度,。經(jīng)過嚴格的性能檢測,,確保品質(zhì),在新藥研發(fā)過程中是一款快速,、重復(fù)性好,、可用于批量產(chǎn)的轉(zhuǎn)染試劑。產(chǎn)品特點:非GMP,,研究級PEI轉(zhuǎn)染試劑溶液,;高轉(zhuǎn)染效率;無縫過渡到MAXgeneGMP,;易放大,,可預(yù)測產(chǎn)量;用于工藝開發(fā),,臨床前和早期臨床研究,。請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bioSigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑