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對(duì)于某些類型的細(xì)胞如HEK-293,、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞,,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平,。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當(dāng)降低鋪板密度,,以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%,。2.對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞,可適當(dāng)降低鋪板密度,。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成,。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率,。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來而言,,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率,。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。Polysciences轉(zhuǎn)染與遞送相關(guān)產(chǎn)品已正式移交Kyfora Bio,,相關(guān)產(chǎn)品標(biāo)簽將變更為Kyfora Bio by Polysciences,,后續(xù)購買請(qǐng)認(rèn)準(zhǔn)備新品牌。CHO細(xì)胞PEI轉(zhuǎn)染試劑市場報(bào)價(jià)中國地區(qū)代理Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑的是誰?
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瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法1.接種細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前,用膠原酶消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細(xì)胞濃度,,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,總體積如表1所示,,每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA,。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請(qǐng)勿顛倒添加順序)。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物,。當(dāng)溶液體積較大時(shí),請(qǐng)用圓底聚丙烯管,,例如Falcon5mL/14mL離心管,。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),,去除生長培養(yǎng)基,,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。4.孵育細(xì)胞和分析結(jié)果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測(cè),。轉(zhuǎn)染后快7h即可檢測(cè)到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。請(qǐng)自行確定檢測(cè)時(shí)間,。更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物,!MAXgene GMP是一種cGMP級(jí)PEI轉(zhuǎn)染試劑。MSC培養(yǎng)PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理
PEI轉(zhuǎn)染試劑能用于體內(nèi)轉(zhuǎn)染么,?MSC培養(yǎng)PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理
KyforaBiobyPolysciences轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,,PEI)的產(chǎn)品,因其較高的轉(zhuǎn)染效果,,已廣泛應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn),。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機(jī)大分子,每相隔二個(gè)碳原子,,即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,,使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”體(protonsponge)。PEI可用作轉(zhuǎn)染試劑,,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞,。有實(shí)驗(yàn)證明,分子量為25000的線性PEI即KyforaBiobyPolysciences23966(PEI25K)轉(zhuǎn)染效率表現(xiàn)優(yōu)良,。請(qǐng)關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bioMSC培養(yǎng)PEI轉(zhuǎn)染試劑官方代理