注意事項質(zhì)粒質(zhì)量:請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者MN公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒),。通過260nm光吸收測定DNA濃度,,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)),。如有可能,,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性,。細胞條件:使用適當保存和經(jīng)常傳代的健康細胞,。確保培養(yǎng)基沒有被細菌,、或支原體污染,。如果細胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細胞,,請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細胞。如想申請PEI試用裝,,歡迎關(guān)注公眾號:Mine-bio,,回復(fù)“申請PEI”,即可參加,!PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑,。科研級PEI轉(zhuǎn)染試劑使用注意事項
瞬時轉(zhuǎn)染方法:1.接種細胞:轉(zhuǎn)染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,,每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%,。2.準備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫,。,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑,。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序),。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當溶液體積較大時,,請用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基,。4.孵育細胞和分析結(jié)果:在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細胞至可以分析檢測,。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達,。請自行確定適合檢測時間,。或者關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio四川細胞擴增PEI轉(zhuǎn)染試劑PEI轉(zhuǎn)染試劑是粉末的還是液體的,?
產(chǎn)品簡介Transporter5轉(zhuǎn)染試劑是一種非GMP等級的即用型線性聚乙烯亞胺(PEI轉(zhuǎn)染試劑)溶液,,由PEIMAX配置而成,,采用0.1umPES無菌過濾器,完全消除支原體污染風險,。Transporter5將DNA縮聚成帶正電荷的復(fù)合物,,這些復(fù)合物很容易通過內(nèi)吞作用進入細胞,并且Transporter5-DNA復(fù)合物能很好地抵御溶酶體的降解作用,,有效提高轉(zhuǎn)染效率,。適用于工藝開發(fā)、臨床前和早期臨床研究,,可無縫過渡到MAXgeneGMP用于商業(yè)化生產(chǎn),。Transporter5轉(zhuǎn)染試劑能高效地將DNA轉(zhuǎn)染入HEK-293、CHO,、COS,、HELA、昆蟲(SF9,、SF21)等真核細胞系,可作用于大到135,000個核苷酸的質(zhì)粒,,所以較大的質(zhì)粒也可以成功地轉(zhuǎn)染,。Transporter5可節(jié)省試劑準備時間,加快項目進度,。經(jīng)過嚴格的性能檢測,,確保品質(zhì),在新藥研發(fā)過程中是一款快速,、重復(fù)性好,、可用于批量產(chǎn)的轉(zhuǎn)染試劑。
材料:質(zhì)粒DNA指數(shù)生長的真核細胞PEI(聚乙烯亞胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI儲存液(100μM):稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,,0.2μm濾膜過濾,,儲存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS(pH7.4):將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,,加入20ml1M的HEPES,,調(diào)pH值到7.4,定容至1L,,過濾(0.2μm濾膜)后儲存于4℃?zhèn)溆谩7椒ǎ?.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,,用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%),。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染,。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基。更多產(chǎn)品信息,,歡迎咨詢上海曼博生物,!PEI轉(zhuǎn)染試劑不含動物源成分,。
產(chǎn)品特點:PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),,是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級產(chǎn)品。相比于PEI25K,,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙?;?.鹽酸鹽形式,,具更高的水溶特性,;3.含更長連續(xù)性乙烯亞胺片段,其質(zhì)子化氮水平比PEI25K提高11%以上,。應(yīng)用領(lǐng)域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級的PEI轉(zhuǎn)染試劑,,適用于基礎(chǔ)學(xué)術(shù)研究和藥物研發(fā)早期階段,以固體粉末形式提供,,需用戶自行配置(詳情見使用方法),?;蛘哧P(guān)注我們的公眾號:Mine-bioPEI轉(zhuǎn)染試劑的主要分子量是多少,?SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑病毒產(chǎn)量
PEI轉(zhuǎn)染試劑,科學(xué)界的得力助手,,加速基因功能研究步伐,。科研級PEI轉(zhuǎn)染試劑使用注意事項
產(chǎn)品特點:PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),,是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級產(chǎn)品,。相比于PEI25K,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙?;?;2.鹽酸鹽形式,具更高的水溶特性,;3.含更長連續(xù)性乙烯亞胺片段,,其質(zhì)子化氮水平比PEI25K提高11%以上。應(yīng)用領(lǐng)域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級的PEI轉(zhuǎn)染試劑,,適用于基礎(chǔ)學(xué)術(shù)研究和藥物研發(fā)早期階段,,以固體粉末形式提供,需用戶自行配置(詳情見使用方法),。歡迎關(guān)注曼博生物公眾號:Mine-bio科研級PEI轉(zhuǎn)染試劑使用注意事項