穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法:1.接種細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一晚,,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細(xì)胞濃度,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,,每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶(hù)自行摸索配比,,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請(qǐng)勿顛倒添加順序),。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí),,請(qǐng)用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),,去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基,替換成無(wú)血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio PEI轉(zhuǎn)染試劑的工作原理是什么,?RNAPEI轉(zhuǎn)染試劑運(yùn)輸方式
材料:質(zhì)粒DNA指數(shù)生長(zhǎng)的真核細(xì)胞PEI(聚乙烯亞胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI儲(chǔ)存液(100μM):稱(chēng)取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,0.2μm濾膜過(guò)濾,,儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS(pH7.4):將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,,加入20ml1M的HEPES,調(diào)pH值到7.4,,定容至1L,,過(guò)濾(0.2μm濾膜)后儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆谩7椒ǎ?.細(xì)胞分盤(pán):通過(guò)胰酶消化收集細(xì)胞,,用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿,,使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開(kāi)始轉(zhuǎn)染,。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無(wú)血清培養(yǎng)基,。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品技術(shù)問(wèn)題,歡迎咨詢(xún)上海曼博生物,。RNAPEI轉(zhuǎn)染試劑運(yùn)輸方式PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽(yáng)離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑,。
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法:1.接種細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)(不建議用胰酶),。調(diào)整細(xì)胞濃度,,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,,每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%,。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫,。依據(jù)表1所示,,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑,。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶(hù)自行摸索配比,,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同),。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請(qǐng)勿顛倒添加順序),。充分混勻后,,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí),,請(qǐng)用圓底聚丙烯管,,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿,。在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),,去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基,替換成無(wú)血清培養(yǎng)基,,然后滴DNA-PEI復(fù)合物,。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,。近期還有PEIfree申請(qǐng)活動(dòng),,歡迎咨詢(xún)上海曼博生物!
注意事項(xiàng)質(zhì)粒質(zhì)量:請(qǐng)務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級(jí)無(wú)內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者M(jìn)N公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒),。通過(guò)260nm光吸收測(cè)定DNA濃度,,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,,請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性,。細(xì)胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒(méi)有被細(xì)菌,、或支原體污染,。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次,。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞,。近期還有PEIfree申請(qǐng)活動(dòng),歡迎咨詢(xún)上海曼博生物,!歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,,回復(fù)關(guān)鍵詞“申請(qǐng)PEI”,即可參加活動(dòng),!更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品信息,,歡迎咨詢(xún)上海曼博生物!或者關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bioPEI轉(zhuǎn)染試劑如何溶解和配置,?
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PEI MAX 是一款高度濃縮的粉劑,大量科學(xué)家選擇PEI MAX ,,在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉(zhuǎn)染試劑,。RNAPEI轉(zhuǎn)染試劑運(yùn)輸方式
產(chǎn)品特點(diǎn):PEIMAX40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),是線性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級(jí)產(chǎn)品,。相比于PEI25K,,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙酰化),;2.鹽酸鹽形式,,具更高的水溶特性;3.含更長(zhǎng)連續(xù)性乙烯亞胺片段,,其質(zhì)子化氮水平比PEI25K提高11%以上,。應(yīng)用領(lǐng)域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級(jí)的PEI轉(zhuǎn)染試劑,適用于基礎(chǔ)學(xué)術(shù)研究和藥物研發(fā)早期階段,,以固體粉末形式提供,,需用戶(hù)自行配置(詳情見(jiàn)使用方法)。RNAPEI轉(zhuǎn)染試劑運(yùn)輸方式