材料:質(zhì)粒DNA指數(shù)生長(zhǎng)的真核細(xì)胞PEI(聚乙烯亞胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI儲(chǔ)存液(100μM):稱(chēng)取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,,0.2μm濾膜過(guò)濾,,儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS(pH7.4):將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,加入20ml1M的HEPES,,調(diào)pH值到7.4,,定容至1L,過(guò)濾(0.2μm濾膜)后儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆?。方法?.細(xì)胞分盤(pán):通過(guò)胰酶消化收集細(xì)胞,,用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿,使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90%),。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開(kāi)始轉(zhuǎn)染,。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無(wú)血清培養(yǎng)基。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品技術(shù)問(wèn)題,,歡迎咨詢(xún)上海曼博生物,。無(wú)需昂貴設(shè)備,PEI試劑實(shí)現(xiàn)經(jīng)濟(jì)高效率的基因轉(zhuǎn)染方案,。SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑廠家
產(chǎn)品簡(jiǎn)介T(mén)ransporter5轉(zhuǎn)染試劑是一種非GMP等級(jí)的即用型線(xiàn)性聚乙烯亞胺(PEI轉(zhuǎn)染試劑)溶液,,由PEIMAX配置而成,采用0.1umPES無(wú)菌過(guò)濾器,,完全消除支原體污染風(fēng)險(xiǎn),。Transporter5將DNA縮聚成帶正電荷的復(fù)合物,這些復(fù)合物很容易通過(guò)內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞,,并且Transporter5-DNA復(fù)合物能很好地抵御溶酶體的降解作用,,有效提高轉(zhuǎn)染效率。適用于工藝開(kāi)發(fā),、臨床前和早期臨床研究,,可無(wú)縫過(guò)渡到MAXgeneGMP用于商業(yè)化生產(chǎn)。Transporter5轉(zhuǎn)染試劑能高效地將DNA轉(zhuǎn)染入HEK-293,、CHO,、COS、HELA,、昆蟲(chóng)(SF9,、SF21)等真核細(xì)胞系,可作用于大到135,000個(gè)核苷酸的質(zhì)粒,所以較大的質(zhì)粒也可以成功地轉(zhuǎn)染,。Transporter5可節(jié)省試劑準(zhǔn)備時(shí)間,,加快項(xiàng)目進(jìn)度。經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的性能檢測(cè),,確保品質(zhì),,在新藥研發(fā)過(guò)程中是一款快速、重復(fù)性好,、可用于批量產(chǎn)的轉(zhuǎn)染試劑,。更多關(guān)于KyforaBiobyPolysciencesPEI轉(zhuǎn)染試劑,歡迎咨詢(xún)上海曼博生物,!cGMP級(jí)PEI轉(zhuǎn)染試劑價(jià)格用PEI轉(zhuǎn)染試劑為什么會(huì)出現(xiàn)沉淀,?
注意事項(xiàng)質(zhì)粒質(zhì)量:請(qǐng)務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級(jí)無(wú)內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者M(jìn)N公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒)。通過(guò)260nm光吸收測(cè)定DNA濃度,,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)),。如有可能,請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性,。細(xì)胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞,。確保培養(yǎng)基沒(méi)有被細(xì)菌、或支原體污染,。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,,請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞,。歡迎關(guān)注曼博生物公眾號(hào):Mine-bio
注意事項(xiàng)質(zhì)粒質(zhì)量:請(qǐng)務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級(jí)無(wú)內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者M(jìn)N公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒),。通過(guò)260nm光吸收測(cè)定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)),。如有可能,,請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性。細(xì)胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞,。確保培養(yǎng)基沒(méi)有被細(xì)菌,、或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,,請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次,。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞。更多Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑等相關(guān)產(chǎn)品信息,,歡迎咨詢(xún)上海曼博生物,!近期還有PEI試用裝申請(qǐng)活動(dòng),可關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio無(wú)需復(fù)雜操作,,PEI試劑簡(jiǎn)化基因?qū)肓鞒獭?/p>
產(chǎn)品特點(diǎn):PEIMAX40K是線(xiàn)性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式(LinearPolyethylenimineHydrochloride),,是線(xiàn)性化聚乙烯亞胺PEI25K的升級(jí)產(chǎn)品。相比于PEI25K,,PEIMAX40K:1.完全水解(去乙?;?.鹽酸鹽形式,,具更高的水溶特性,;3.含更長(zhǎng)連續(xù)性乙烯亞胺片段,其質(zhì)子化氮水平比PEI25K提高11%以上,。應(yīng)用領(lǐng)域:PEIMAX40K(cat#24765)是一款非GMP等級(jí)的PEI轉(zhuǎn)染試劑,,適用于基礎(chǔ)學(xué)術(shù)研究和藥物研發(fā)早期階段,以固體粉末形式提供,,需用戶(hù)自行配置(詳情見(jiàn)使用方法),。PEI轉(zhuǎn)染試劑和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的區(qū)別?SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑廠家
用PEI轉(zhuǎn)染時(shí),,一般和DNA的比例會(huì)是多少?SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑廠家
PEIMAX——高產(chǎn)工業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑-高度濃縮,,可制備大量轉(zhuǎn)染試劑Polysciences轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產(chǎn)品,,因其較高的轉(zhuǎn)染效果,,已廣泛應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機(jī)大分子,,每相隔二個(gè)碳原子,,即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(protonsponge)體,。PEI可用作轉(zhuǎn)染試劑,,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞。PEIMAX40K是由Polysciences出品的全合成線(xiàn)性聚乙烯亞胺瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試劑,。PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑,,大量科學(xué)家選擇PEIMAX,在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉(zhuǎn)染試劑,。多年以來(lái),,經(jīng)過(guò)眾多業(yè)內(nèi)人士評(píng)審的公開(kāi)研究和出版文獻(xiàn)表明,在HEK293,、CHO和Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉(zhuǎn)染效率,,在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性高,可靠性強(qiáng),。PEIMAX提供從96孔板到200L生物反應(yīng)器持續(xù)的高基因表達(dá)細(xì)胞體系,,實(shí)現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過(guò)度。而且與大多數(shù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染方案相比,,使用PEIMAX至少可降低40%轉(zhuǎn)染成本(部分案例可降低90%轉(zhuǎn)染成本),。更多PEI MAX相關(guān)產(chǎn)品信息,,歡迎咨詢(xún)上海曼博生物!SigmaPEI轉(zhuǎn)染試劑廠家