目的制備高含量細(xì)胞因子的血小板裂解液(PL).方法采用反復(fù)凍融法[-80℃~37℃凍融3次(凍24 h/次)]和超聲法(285 W,每次超聲處理5 s停止5 s,共10次)處理10份單**小板制劑(30 m L/份),ELISA法對細(xì)胞因子,血小板衍生長因子(PDGF)-AA,PDGF-AB,PDGF-BB,轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1),血管內(nèi)皮生長因子165(VEGF165)檢測,同時將2種方法制備的PL按10%比例加入常規(guī)培養(yǎng)基DMEM/F12培養(yǎng)第5代人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞,觀察傳至第7代細(xì)胞增殖情況,并與FBS液培養(yǎng)(組)比較.結(jié)果血小板保存3 d后制備成的PL各因子含量均升高GMP級人血小板裂解液, 富含各類生長因子, 是很好的胎牛血清替代物,。品相佳血小板裂解液品牌比較

解凍后的血小板裂解液在4°C的保存時間不建議超過24小時，否則會影響性能Sexton進行了內(nèi)部研究,，以檢查保存在4°C冷藏溫度下的解凍hPL的穩(wěn)定性,。對Stemulate和nLivenPR都進行了檢查,，以確定解凍的產(chǎn)品在4°C下可以儲存多長時間，然后才會影響性能和放行指標(biāo),。根據(jù)結(jié)果,，不建議在添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基之前將解凍的hPL產(chǎn)品在4°C冰箱中儲存超過24小時。數(shù)據(jù)表明,，在初始解凍后在4°C下儲存超過24小時時,，滲透壓和生長性能會發(fā)生統(tǒng)計學(xué)上的顯著變化。雖然結(jié)果在解凍后5天內(nèi)仍處于合格參數(shù)指標(biāo)范圍內(nèi),，但建議盡快使用該產(chǎn)品,，以減少使用之間的差異以及和COA上的偏差。美國血小板裂解液細(xì)胞添加劑有人知道血小板裂解液的價格么,？

Sextonh的PL血小板裂解液產(chǎn)品接收時處于干冰運輸?shù)睦鋬鰻顟B(tài),。收到hPL產(chǎn)品后，建議客戶立即將產(chǎn)品儲存在-20°C的環(huán)境中,。Sexton有數(shù)據(jù)支持運輸期間短時間的干冰保存對產(chǎn)品性能（包括pH值,、滲透壓、總蛋白和細(xì)胞生長）沒有顯著影響,。Sexton hPL產(chǎn)品的解凍應(yīng)按照Sexton產(chǎn)品說明文件中的建議使用37°C水浴進行,。Sexton不建議使用4°C冰箱或室溫解凍方法，因為這些做法尚未經(jīng)過測試或作為任何內(nèi)部驗證的一部分,。已知使用冰箱或室溫解凍會導(dǎo)致更高水平的纖維蛋白/纖維蛋白原碎片,，并可能導(dǎo)致產(chǎn)品性能下降。37°C水浴是Sexton用于所有批次放行測試的內(nèi)部解凍方法,，也是與Sexton hPL產(chǎn)品相關(guān)的所有驗證的解凍方法,。

間充質(zhì)間質(zhì)細(xì)胞(MSCs)體外擴增的培養(yǎng)基一般添加胎牛血清FBS，但是考慮到異種ganran及免疫反應(yīng)的風(fēng)險,，監(jiān)管機構(gòu)并不鼓勵使用,。人血小板裂解液除了不存在異種免疫反應(yīng)或牛病原體ganran的風(fēng)險，有助于增強間充質(zhì)干細(xì)胞的擴增,，也相對容易地根據(jù)良好的生產(chǎn)規(guī)范程序生產(chǎn),，并已用于臨床應(yīng)用，因此現(xiàn)如很多資料顯示血小板裂解液已被證明是擴增MSCs一種非常有效的FBS替代方法（參考文獻1）,。 血小板裂解液由血漿組成,，含有纖維蛋白原和凝血因子，對于一般細(xì)胞培養(yǎng)中涉及的含鈣培養(yǎng)基來說通常需要加入抗凝劑（常用肝素,、Rivaroxaban利伐沙班,、argatroban阿加曲班等）來防止凝膠形成，其中肝素很為常用,。血小板裂解液進口是不是很難,？

本研究中使用的HPL是Stemulate公司兩款人源血小板裂解液（NH和H)是在工業(yè)規(guī)模(很小批量為20L)生產(chǎn)的,，具備高度的批間一致性。將脂肪來源的間充質(zhì)干細(xì)胞在DME/F-12中添加10%Stemulate-NH或10%FBS進行傳代培養(yǎng)11代,。在DME/F-12中分別添加5,、7.5或10%Stemulate-NH，并與10%胎牛血清進行比較,。羊膜來源間充質(zhì)干細(xì)胞也在2.5或5%Stemulate中培養(yǎng),，與10%胎牛血清相比。牙髓來源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在DME/F-12中添加不同濃度的Stemulate-NH或Stemulate-H,，并與添加10%FBS的培養(yǎng)基進行比較,。在所有實驗中，每天都監(jiān)測細(xì)胞,，每次傳代結(jié)束時,，收獲細(xì)胞，并使用臺盼藍和一個自動細(xì)胞計數(shù)器計數(shù)然后繼續(xù)傳代,。血小板裂解液和胎牛血清相比有什么優(yōu)勢,？無需添加肝素血小板裂解液的解凍方法

血小板裂解液(platelet lysate,PL)是自體或異體血小板富集物經(jīng)細(xì)胞裂解后的產(chǎn)物。品相佳血小板裂解液品牌比較

前述所說的生長因子大多存在于血小板內(nèi)部的α顆粒中,，當(dāng)血小板被活化后會產(chǎn)生脫顆粒作用（即血小板的α顆粒會和細(xì)胞膜融合）,，進而釋放大量活化的生長因子。而人源血小板裂解物就是直接將人類來源血小板細(xì)胞經(jīng)過連續(xù)的反復(fù)凍融裂解后,，進一步提純這些血小板脫顆粒的商品,；人源血小板裂解物除了擁有比富血小板血漿更高的生長因子濃度，更用特殊工藝去除了細(xì)胞碎片,，大幅降低了使用過程中的免疫原性。

人源血小板裂解物的使用方式非常方便簡單,，在培養(yǎng)基中添加5%血小板裂解物,，混合均勻后即可直接用來培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞，且在傳代過程中不需要預(yù)包被培養(yǎng)皿,。適合應(yīng)用在多種來源的間充質(zhì)原代干細(xì)胞培養(yǎng)過程呦,！ 品相佳血小板裂解液品牌比較

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