酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)為免疫學(xué)中的經(jīng)典實(shí)驗(yàn),通常其基本原理是:首先將一抗體包被到某固相載體表面,,再將另一抗體與某酶連接成酶標(biāo)抗體,。在測(cè)定時(shí),把受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體按不同的步驟與包被抗體結(jié)合形成復(fù)合物,。洗滌除去復(fù)合物以外的物質(zhì),,結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),,故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,,故可極大地放大反應(yīng)效果,,從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。Elisa 試劑盒的精密度較高,。義烏血紅蛋白(HB)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
安全性:避免直接接觸終止液和底物A,、B。一旦接觸到這些液體,,請(qǐng)盡快用水沖洗,。實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品,。不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,,不可保存。實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,,以免變質(zhì)。不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A,、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器,。使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子,。底物B對(duì)光敏感,,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。加入試劑的順序應(yīng)一致,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。蘇州基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)Elisa 試劑盒可保障檢測(cè)過(guò)程的準(zhǔn)確性,。
再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體,也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上,。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例,。加入酶反應(yīng)的底物后,底物被酶催化成為有色產(chǎn)物,,產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),,故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,,間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,,使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。ELISA可用于測(cè)定抗原,,也可用于測(cè)定抗體,。然而,影響Elisa試驗(yàn)結(jié)果的因素很多,,故加強(qiáng)各個(gè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點(diǎn),。
檢測(cè)原理主要是通過(guò)利用在96孔板上包被人壞死因子α的單克隆抗體,將標(biāo)準(zhǔn)品和樣本添加到孔中,,使壞死因子α與固定化抗體結(jié)合,,然后加入辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合的小鼠抗人壞死因子α的單克隆抗體,產(chǎn)生抗原-抗體-抗原的“三明治”結(jié)構(gòu),。再次清洗并加入TMB基質(zhì)溶液,,其產(chǎn)生的顏色深淺與樣品中人壞死因子α的含量成線性關(guān)系。結(jié)束酶反應(yīng),,添加停止溶液,,并在450nm處讀取微孔吸光度,只需按照試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的規(guī)定操作流程進(jìn)行檢測(cè)即可得到準(zhǔn)確的測(cè)量結(jié)果,,可很大程度的提高檢測(cè)效率和結(jié)果的可靠性,。Elisa 試劑盒能減少檢測(cè)中的誤差因素。
小鼠島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白:1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,,以避免針眼,。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔一孔的OD值),可以請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,,計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5),。5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染,。6.底物請(qǐng)避光保存,。Elisa 試劑盒在病毒檢測(cè)方面發(fā)揮重要作用。昆山激肽釋放酶3(PSA)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
Elisa 試劑盒能檢測(cè)出微量的目標(biāo)物質(zhì),。義烏血紅蛋白(HB)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)
小鼠蛋白激酶操作步驟:1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,,剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,;3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加,。4.除空白孔外,,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。5.棄去液體,吸水紙上拍干,,每孔加滿(mǎn)洗滌液(350μL),,靜置1min,甩去洗滌液,,吸水紙上拍干,,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。6.每個(gè)孔加入底物A,、B各50μL,,37℃避光孵育15min。義烏血紅蛋白(HB)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)