堿法提取即利用一定濃度的堿在一定的外界條件下提取膠原蛋白,，堿處理法中常用的處理劑為石灰,、氫氧化鈉、碳酸鈉等,，用氫氧化鈉浸提時效果較好。一般的是把樣品勻漿后,，用堿溶液多次溶脹后,，再離心提取。但由于易引起蛋白質(zhì)變性，如膠原肽鍵水解,，含羥基,、疏基的氨基酸全部被破壞；所得產(chǎn)物等電點pH值較低,，天冬酞胺和谷氨酞胺分別轉(zhuǎn)變?yōu)樘於彼岷凸劝彼?，得到的水解產(chǎn)物分子量較在酸性溶液中比低等問題，若比較嚴(yán)重的話,，還會產(chǎn)生D,、L-型氨基酸消旋混合物，若D型氨基酸含量高過L型氨基酸,，則會抑制L-型氨基酸的吸收,，有些D型氨基酸有毒，甚至有致ai,、致畸和致突變的作用,。而且堿法提取的含量較低，用氫氧化鈉從魷魚皮中提取堿溶性膠原蛋白,，其得率只有3%（以濕基計）,。所以，若想提取結(jié)構(gòu)完整,、使用安全的膠原蛋白,，很少采用此方法。有關(guān)單獨采用堿法提取膠原蛋白的報道不多,，一般是堿法提取和酸法提法結(jié)合使用,。比如在4℃條件下，魚骨用,，再用,，用10%的異丙醇溶液去除脂肪，,，現(xiàn)在得到無色無味的膠原蛋白,，提取率為。膠原蛋白肽是**適宜人體吸收的分子量,。吉林大豆膠原蛋白

   膠原蛋白中甘氨酸（Gly）,、丙氨酸（Ala）、脯氨酸（Pro）和谷氨酸（Glu）含量較高,，特別是甘氨酸,，約占總氨基酸的27%，也有報道說占1/3,，即每隔兩個其它氨基酸殘基（X,，Y）即有一個甘氨酸,，故其肽鏈可用（Gly-X-Y）n來表示。每個原膠原分子由三條α-肽鏈組成,，α-肽鏈自身為α螺旋結(jié)構(gòu),，肽鏈中每三個氨基酸殘基中就有一個要經(jīng)過此三股螺旋中間區(qū)，而此處空間十分狹窄,，只有甘氨酸適合于此位置,，由此可解釋其氨基酸組成中每隔兩個氨基酸殘基出現(xiàn)一個甘氨酸的特點。特別注意,，X,、Y均表示任意的氨基酸，只不過X通常是脯氨酸,，Y通常指羥脯氨酸,。同時還含有少量3-羥脯氨酸（3-hydroxyproline）和5-羥賴氨酸（5-hydroxylysine，Hyl）,。羥脯氨酸殘基可通過形成分子內(nèi)氫鍵穩(wěn)定膠原蛋白分子,。三條α-肽鏈借范德化力、氫鍵及共價交聯(lián)則以平行,、右手螺旋形式纏繞成“草繩狀”三股螺旋結(jié)構(gòu),，使膠原具有很高的拉伸強度。重慶大豆膠原蛋白飲品羥脯氨酸殘基可通過形成分子內(nèi)氫鍵穩(wěn)定膠原蛋白分子,。

   由于膠原蛋白廣布于人體各組織中,，系各組織中的重要成分并構(gòu)成組織細胞外基質(zhì)（Extracelluarmatrix，ECM）,，其性質(zhì)是一種天然的組織支架材料,。從臨床應(yīng)用的角度，人們用膠原蛋白制成各種各樣的組織工程支架,，如皮膚,、骨組織,、氣管和血管支架等,。然而以膠原本身而言就有兩大類，即純膠原制備的支架和與其它成分復(fù)合而成的復(fù)合物支架,。純膠原蛋白組織工程支架具有生物相容性好,、易加工、可塑性并能促進細胞黏附,、增殖等優(yōu)點,，但也有膠原蛋白的力學(xué)性能差，在含水時難以塑形,，無法支撐組織重建等不足,。其次在修復(fù)處的新生組織會產(chǎn)生各種各樣的酶，將膠原蛋白水解，導(dǎo)致支架崩解,，而采用交聯(lián)或復(fù)合的方式能改善與提高?，F(xiàn)已成功地將膠原蛋白基生物材料用于人工皮膚、人工骨,、軟骨移植和神經(jīng)導(dǎo)管等組織工程產(chǎn)品,。有人用嵌入軟骨細胞的膠原蛋白凝膠來修復(fù)軟骨缺陷并嘗試用上皮、內(nèi)皮和角膜細胞附在膠原蛋白海綿以適應(yīng)角膜組織,。還有人混合自體同源的間葉細胞中的莖狀細胞和膠原蛋白凝膠制作肌腱用于腱后修復(fù),。

   酶法提取是指可溶性膠原和酸溶性膠原被提取后，需用一些蛋白酶,，如膠原酶,、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶等水解,，得到不同的酶促溶性膠原蛋白,。所使用的蛋白酶主要分3種：動物蛋白酶（如胰蛋白酶，胃蛋白酶）,，植物蛋白酶（如木瓜蛋白酶,，菠蘿蛋白酶），微生物蛋白酶（如堿性蛋白酶,，中性蛋白酶）,。在對酶法水解膠原蛋白的研究中，以堿性蛋白酶應(yīng)用較多,。將膠原進行限制性降解,，即將末端肽切割下來，由于膠原肽鏈間的共價鍵都是通過分子末端肽里的賴氨酸或羥賴氨酸的相互作用形成的,，末端肽被切下后,，含三螺旋結(jié)構(gòu)的主體部分可溶于稀有機酸而被提取出來。用酶處理,，可以水解掉膠原纖維蛋白的末端肽,，提高膠原蛋白的產(chǎn)率；而且還不會破壞膠原蛋白的三股螺旋結(jié)構(gòu),，保持其特性,。影響酶提取的因素有很多，如酶濃度,、酶與底物的比例,、酶解時間、酶解溫度,、pH值以及料液比等,。在實際操作中,，大多數(shù)采用酶復(fù)合法提取膠原蛋白，較多的是使用胃蛋白酶提取,，有機酸多為乙酸,。膠原蛋白是人體內(nèi)含量*豐富的蛋白質(zhì)。

   可用于膠原蛋白的純化方法包括鹽析法,、透析法,、離心法、電泳法和色譜法,，其中鹽析法,、離心法和電泳法較為常用。由于單一方法難以完全分離純化膠原蛋白,，實際操作都是通過復(fù)合法來達到分離純化膠原蛋白的目的,。鹽析法一般采用高濃度NaCl；離心法常選用制備型低溫超速離心機,；電泳法多采用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳法（SDS-PAGE）,，該法既可用于膠原蛋白的分離純化，還可用來測定膠原蛋白分子的相對分子質(zhì)量,。像有人用破碎,、酶解、鹽析三步法提純蘇尼特羊骨骼I型膠原蛋白,。先去除骨頭里的非膠原物質(zhì),，然后往沉淀中10%的胃蛋白酶，在4℃的條件下消化24h,，以14000r/min離心40min,。棄沉淀往上清液中加NaCL，使它終濃度達到,，靜止過夜,，再離心，現(xiàn)在的沉淀就是I型膠原蛋白,。膠原蛋白是人體骨骼,，尤其是軟骨組織中的重要組成成分。湖南大豆膠原蛋白功效和作用

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   IV型膠原蛋白非常細小而且呈線性分布在組織內(nèi)部，是連接表皮和真皮的主要要素,。Ⅴ型膠原的肽鏈由2條α1鏈和1條α2鏈或由3條α1鏈組成，存在3種組裝形式：[α1(Ⅴ)]3,、[α1(Ⅴ)]2α2(Ⅴ)和α1(Ⅴ),、α2(Ⅴ),、α3(Ⅴ)，其中以[α1(Ⅴ)]2α2(Ⅴ)為主,。Ⅴ型膠原分布在細胞周圍以及Ⅰ型膠原的周圍,，可能在基膜和結(jié)締組織之間起著橋梁作用，已經(jīng)從數(shù)種魚類肌肉中分離出來,。XV型膠原蛋白分布較廣而且多分布在血管,、神經(jīng)組織的外面地帶，而且其與角化細胞**黑素細胞分子發(fā)生有關(guān),。[33-36]膠原,、明膠和水解膠原蛋白的電泳分析[37]Ⅺ型膠原是異三聚體，其組成為α1(Ⅺ)α2(Ⅺ)α3(Ⅺ),，Ⅺ型膠原是軟骨的微量成分,，在軟骨膠原纖維的形成和軟骨基質(zhì)的組成中起著重要作用，且常與Ⅱ型膠原共存,。陸生生物的軟骨組織較水生生物含量高的多,，所以Ⅱ型膠原的研究的對象大多是陸生生物，雖然在1984年已經(jīng)從鯊魚的軟骨中分離出來Ⅱ型膠原,，但是從水產(chǎn)動物提?、蛐湍z原的研究并不多。吉林大豆膠原蛋白

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