酶法提取是指可溶性膠原和酸溶性膠原被提取后,，需用一些蛋白酶,，如膠原酶、胃蛋白酶,、木瓜蛋白酶和胰凝乳蛋白酶等水解,，得到不同的酶促溶性膠原蛋白,。所使用的蛋白酶主要分3種：動(dòng)物蛋白酶（如胰蛋白酶,，胃蛋白酶），植物蛋白酶（如木瓜蛋白酶,，菠蘿蛋白酶）,，微生物蛋白酶（如堿性蛋白酶，中性蛋白酶）,。在對(duì)酶法水解膠原蛋白的研究中,，以堿性蛋白酶應(yīng)用較多。將膠原進(jìn)行限制性降解,，即將末端肽切割下來(lái),，由于膠原肽鏈間的共價(jià)鍵都是通過(guò)分子末端肽里的賴氨酸或羥賴氨酸的相互作用形成的，末端肽被切下后,，含三螺旋結(jié)構(gòu)的主體部分可溶于稀有機(jī)酸而被提取出來(lái),。用酶處理，可以水解掉膠原纖維蛋白的末端肽,，提高膠原蛋白的產(chǎn)率,；而且還不會(huì)破壞膠原蛋白的三股螺旋結(jié)構(gòu)，保持其特性,。影響酶提取的因素有很多,，如酶濃度,、酶與底物的比例、酶解時(shí)間,、酶解溫度,、pH值以及料液比等。在實(shí)際操作中,，大多數(shù)采用酶復(fù)合法提取膠原蛋白,，較多的是使用胃蛋白酶提取，有機(jī)酸多為乙酸,。 這些食物中的膠原蛋白分子量非常大,，極不容易被人體吸收。四川海鯛魚膠原蛋白功效和作用

    酸法處理時(shí),，反應(yīng)強(qiáng)烈,，水解徹底，多生成氨基酸混合物,，而且使用酸提取時(shí),，根據(jù)酸濃度、水解溫度,、水解時(shí)間等條件的不同,，可以得到分子量不均的膠原水解物。但是在即使中等濃度酸徹底水解過(guò)程中色氨酸也會(huì)全部被破壞,，絲氨酸和酪氨酸也會(huì)部分被破壞,，且設(shè)備腐蝕嚴(yán)重。因此,，酸法溶出生物醫(yī)用膠原要準(zhǔn)確控制酸度,、溫度、時(shí)間等影響因素,。由于各種不足,，酸法很少單獨(dú)使用，一般和酶法配合,。比如以豬皮為原料,，在檸檬酸（）和胃蛋白酶協(xié)同下提取膠原蛋白。在處理后的豬皮中加（）處理一段時(shí)間,，然后再用NaCL鹽析,，現(xiàn)在提取率為，提取物保持了完整三股螺旋結(jié)構(gòu)的I型膠原蛋白,。還有人以雛雞胸軟骨為原材料,，在，在4℃,，20000r條件下離心20min,，現(xiàn)在應(yīng)用DEAE-SephadexA-50進(jìn)行離子交換層析,，之后透析，再用NaCL鹽析,，現(xiàn)在得到純化的膠原蛋白Ⅱ型,。 安徽小分子膠原蛋白粉需要的膠原蛋白，其實(shí)是一種由3個(gè)氨基酸分子組成的膠原蛋白即“膠原三肽”,。

鹽法提取是利用各種不同的鹽在不同的濃度條件下提取鹽溶性膠原蛋白的方法,。常用來(lái)提取膠原的鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷（Tris-HCl）、氯化鈉,、檸檬酸鹽等,。在中性條件下，當(dāng)鹽的濃度達(dá)到一定量時(shí),，膠原就會(huì)溶解在其中,，但是膠原的溶解和分級(jí)受中性鹽效應(yīng)影響，有的鹽可提高膠原的穩(wěn)定性,，而有的則可降低其構(gòu)象穩(wěn)定性,，從而對(duì)提取天然膠原蛋白很不利。此外,，可采用不同濃度的氯化鈉對(duì)提取的膠原蛋白進(jìn)行鹽析處理,，可以沉淀出不同類型的膠原蛋白。

    IV型膠原蛋白非常細(xì)小而且呈線性分布在組織內(nèi)部,，是連接表皮和真皮的主要要素,。Ⅴ型膠原的肽鏈由2條α1鏈和1條α2鏈或由3條α1鏈組成，存在3種組裝形式：[α1(Ⅴ)]3,、[α1(Ⅴ)]2α2(Ⅴ)和α1(Ⅴ),、α2(Ⅴ)、α3(Ⅴ),，其中以[α1(Ⅴ)]2α2(Ⅴ)為主。Ⅴ型膠原分布在細(xì)胞周圍以及Ⅰ型膠原的周圍,，可能在基膜和結(jié)締組織之間起著橋梁作用,，已經(jīng)從數(shù)種魚類肌肉中分離出來(lái)。XV型膠原蛋白分布較廣而且多分布在血管,、神經(jīng)組織的外面地帶,，而且其與角化細(xì)胞**黑素細(xì)胞分子發(fā)生有關(guān)。[33-36]膠原,、明膠和水解膠原蛋白的電泳分析[37]Ⅺ型膠原是異三聚體,，其組成為α1(Ⅺ)α2(Ⅺ)α3(Ⅺ)，Ⅺ型膠原是軟骨的微量成分,，在軟骨膠原纖維的形成和軟骨基質(zhì)的組成中起著重要作用,，且常與Ⅱ型膠原共存,。陸生生物的軟骨組織較水生生物含量高的多，所以Ⅱ型膠原的研究的對(duì)象大多是陸生生物,，雖然在1984年已經(jīng)從鯊魚的軟骨中分離出來(lái)Ⅱ型膠原,，但是從水產(chǎn)動(dòng)物提取Ⅱ型膠原的研究并不多,。 皮膚的光澤取決于含水量,，膠原三肽良好的保水能力使皮膚水潤(rùn)亮澤，散發(fā)健康的光彩,。

由于無(wú)脊椎動(dòng)物與脊椎動(dòng)物在進(jìn)化上相距遙遠(yuǎn),，它們的膠原性質(zhì)存在明顯的差異。水產(chǎn)無(wú)脊椎動(dòng)物的膠原主要可分為兩類,，類Ⅰ型及類Ⅴ型膠原,，均相當(dāng)于脊椎動(dòng)物的Ⅰ型膠原。其中類Ⅰ型膠原比較富含有丙氨酸和糖結(jié)合型的羥賴氨酸,，比較廣的存在于軟體動(dòng)物的各種部位中,，包括：烏賊類的皮和頭蓋軟骨、章魚的皮鮑的肌肉和外套膜等,。類Ⅴ型膠原是丙氨酸含量比較少,、富含糖結(jié)合型羥賴氨酸，已從磯?？闹心z層,、節(jié)足動(dòng)物蝦類和蟹類的肌肉及皮下膜以及原索動(dòng)物羅氏石勃卒的肌膜體中分離出來(lái)。與脊椎動(dòng)物相比,，水產(chǎn)無(wú)脊椎動(dòng)物的膠原明顯難溶,，富含于羥賴氨酸，尤其是糖結(jié)合型含量多,，而且纖維的直徑小于50nm,。 膠原蛋白已廣泛應(yīng)用于各種化學(xué)試劑交聯(lián)膠原。江西膠原蛋白口服液

膠原蛋白不易被普通蛋白酶水解,，但能被動(dòng)物膠原酶斷裂,。四川海鯛魚膠原蛋白功效和作用

    交聯(lián)指使膠原分子內(nèi)部和分子間通過(guò)共價(jià)健結(jié)合提高膠原纖維的張力和穩(wěn)定性的方法。該法又分為物理方法,、化學(xué)方法和低溫等離子體法,，生物學(xué)方法；其中物理方法,、化學(xué)方法是較常用的交聯(lián)改性方法,，生物學(xué)方法改性膠原蛋白主要在研究有關(guān)動(dòng)物老化的生命現(xiàn)象中涉及，在研制膠原基生物醫(yī)學(xué)材料中少見報(bào)道,。[74][127]物理方法通過(guò)物理手段對(duì)膠原蛋白改性有紫外線照射,、重度脫水,、λ射線照射和熱交聯(lián)等方法。膠原溶液如被紫外線等照射,，將在分子間產(chǎn)生交聯(lián),，粘度增加，生成凝膠,。常用的紫外線交聯(lián)膠原膜的方法是將膠原膜放在鋁箔上,，距離254nm紫外燈20cm高度，照射1～5h,。對(duì)紫外線照射的膠原膜進(jìn)行力學(xué)性能和膠原酶試驗(yàn)表明：交聯(lián)膠原膜的萎縮溫度Ts和抗膠原酶解的能力均明顯高于未交聯(lián)膠原膜,。[128]重度脫水也是膠原蛋白物理改性中常使用的方法，該法是通過(guò)脫水導(dǎo)致膠原分子間交聯(lián),，從而增加變性溫度,，改善膠原的性能。改性后膠原膜生物相容性提高,，降低了水溶性,，影響了膜與成骨細(xì)胞的生物相容性。物理方法改性原蛋白的優(yōu)點(diǎn)是可避免外源性有毒化學(xué)物質(zhì)進(jìn)入膠原內(nèi),，缺點(diǎn)是膠原膜交聯(lián)度低,，且難以獲得均勻一致的交聯(lián)。 四川海鯛魚膠原蛋白功效和作用

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