2025-05-10
二,、成分提取
1. 初步分離
離心:低速離心(如500-1000×g,,5分鐘)去除未破碎的細(xì)胞碎片,;高速離心(如10,000×g,15分鐘)分離細(xì)胞器(如線粒體,、細(xì)胞核),。
過(guò)濾:用濾膜(如0.22μm或0.45μm)去除大顆粒雜質(zhì)。
2. 目標(biāo)成分純化
蛋白質(zhì)提?。?
使用裂解液(含去垢劑,、鹽和緩沖液)溶解蛋白。
離心后收集上清液,,通過(guò)親和層析(如His標(biāo)簽純化),、沉淀法(如硫酸銨沉淀)或電泳分離。
核酸提?。?
DNA:酚-氯仿抽提去除蛋白質(zhì),,乙醇沉淀純化。
RNA:TRIzol法提取,,注意避免RNase污染,。
細(xì)胞器分離:
差速離心或密度梯度離心(如蔗糖梯度)分離線粒體、葉綠體等,。
代謝物提?。?
有機(jī)溶劑(如甲醇、乙腈)萃取,,或冷凍干燥后溶解,。
3. 濃縮與保存
濃縮:超濾離心管、凍干或真空濃縮,。
保存:分裝后低溫保存(-20℃或-80℃),避免反復(fù)凍融,。
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