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超濾離心管,備有四種材質(zhì)的超濾膜:聚醚砜,、三醋酸纖維素,、再生纖維素和Hydrosart,可根據(jù)不同要求靈活選用,。 使用注意事項(xiàng) (1)選擇合適的超濾管,。通常應(yīng)截留分子量不應(yīng)大于目的蛋白分子量的1/3,比如目的蛋白分子量為35kDa,,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管,。若目的蛋白分子量為10kD左右,,則可以用截留分子量3kD的超濾管。認(rèn)真閱讀使用說明書,,注意超濾膜對(duì)各種化學(xué)物質(zhì)的耐受程度有所不同,。 (2)新買來的超濾是干燥的,使用前加入超純水,,水量完全過膜,,冰浴或冰箱里預(yù)冷幾分鐘。然后將水倒出,,即可加入蛋白液,,加入的多少,以不超過管頂?shù)陌拙€為準(zhǔn),。操作要輕,,加入蛋白液前,超濾管需要插在冰上預(yù)冷,。 (3)平衡,。質(zhì)量和重心二者都要達(dá)到平衡。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快,,否則直接損壞超濾膜,。開始離心超濾(離心機(jī)預(yù)冷至4度)。不同離心機(jī)的轉(zhuǎn)速 rpm換算成g之后,,有所不同,。離心機(jī)的加速度調(diào)至較低檔,減小對(duì)膜的壓力,。超濾離心管通常被用于天然藥物研究和制備中,。蘇州高離心力離心管排行榜
當(dāng)濃縮到剩下1ml時(shí),取50ul緩沖溶液,,加入10ul流穿,,看有沒變藍(lán)色,以此判斷超濾管是否漏掉蛋白,。如果管漏了,,將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管,,用5mgml的BSA離心10min,,再取流穿,跑蛋白膠或Bradford粗測(cè),,繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮(在冰上操作,,防止蛋白受熱),直到所有濃縮液都加完為止,。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,,導(dǎo)致堵管,。若發(fā)生沉淀,要確定沉淀的具體原因,,是蛋白濃度過高還是Buffer不合適,;前者可用多根超濾管同時(shí)超濾,降低濃度的辦法解決,,后者的方法是換不同的緩沖溶液,,直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。蘇州離心管使用方法超濾離心管可用于分離細(xì)胞培養(yǎng)上清中的蛋白質(zhì)和小分子物質(zhì),。
超濾作為一種膜分離技術(shù),,普遍應(yīng)用于生物樣品的濃縮、脫鹽和緩沖液置換,,其原理是溶液在力的作用下,,通過超濾膜孔徑的篩濾,大分子量的顆粒被截留下來,,而水、溶劑和低分子量溶質(zhì)則允許透過膜,,從而達(dá)到濃縮,、脫鹽和緩沖液置換的目的,這種方法較大的特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便,、快速,、高效,可同時(shí)濃縮和純化分子,。如何使用超濾心離心管1. 使用角轉(zhuǎn)子加到超濾裝置上,,較大樣本量為15 毫升(Anavo Ultra-15)。2. 將帶蓋過濾裝置放入離心機(jī)轉(zhuǎn)子內(nèi); 用一個(gè)類似的裝置來平衡,。3. 使用定角轉(zhuǎn)子時(shí),,將薄膜面板朝上定位,較大旋轉(zhuǎn) 5000 xg,,旋轉(zhuǎn) 30 分鐘,。4. 為了回收濃縮的溶質(zhì),在過濾裝置的底部插入一個(gè)移液管,,通過左右掃動(dòng)的方式將樣品抽離,,以保證總回收率。超濾液可貯存在離心管中,。說明:為達(dá)到較佳回收率,,離心后應(yīng)立即取出濃縮樣品。
超濾離心管的分子量選擇:按照樣品量和目標(biāo)分子量選擇適當(dāng)?shù)某瑸V離心管,,為了得到較高的收率,,所選濾膜的截留分子量MWCO建議選擇所需截留分子大小的1/3左右,,不超過目標(biāo)分子量的一半。因?yàn)槌瑸V膜上孔徑是平均孔徑,,膜上的孔并非均勻,,離心高壓下也可能滲漏,因此截留孔徑越小,,流速越慢但截留比例更大,。如果樣本濃度低體積大,可選擇較小容積的超濾管多次重復(fù)加樣離心,。如果同時(shí)需要脫鹽和去除可溶小分子雜質(zhì),,可將待濃縮樣品稀釋到超濾管較大容積再離心,重復(fù)2次可除去99%鹽,。避免過長時(shí)間或者過速離心,,雖然優(yōu)良品質(zhì)的產(chǎn)品都有防死端設(shè)計(jì),可避免過度離心造成膜表面干而造成不可逆吸附,。避免過度濃縮,,體積越小,越容易因表面吸附而損失得率,。離心后用Tips輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液,,必要時(shí)補(bǔ)加一定體積的緩沖液沖洗膜表面,有助于減少膜表面吸附,,能提高回收率,。盡量避免Tips接觸膜表面。超濾離心管可以用于分離并提取草藥材料中的有效成分,,以進(jìn)行藥理學(xué)和毒理學(xué)研究,。
超濾離心管應(yīng)用:1、組成部分:該裝置包括一個(gè)蓋子,、一個(gè)過濾器和一個(gè)50ML的離心管,。2、帶有擺桶式或定角式轉(zhuǎn)子的離心器以及可以容納50mL試管的樣本腔/試管座,。①注意:為了避免在離心過程中損壞裝置,,在旋轉(zhuǎn)前請(qǐng)檢查間隙。 3,、帶有200微升(μL)的移液管,,用于濃縮液回收適用性。①注意:該產(chǎn)品未經(jīng)消毒,,只供一次使用,,保質(zhì)期3年。為確保對(duì)預(yù)定用途的適用性,建議進(jìn)行初步的回收和截留試驗(yàn),。4,、濃縮含有抗原、抗體,、酶,、核酸(單株或雙株DNA/RNA樣本)、微生物,、洗出液和凈化樣本的生物樣本,。5、凈化組織培養(yǎng)基提取液和細(xì)胞溶解液中的大分子成分,,從反應(yīng)混合液中去除引物,、連接或分子標(biāo)記,在HPLC之前去除蛋白質(zhì),。超濾離心管還可用于檢測(cè)藥品樣品中的殘留物和污染物,,并進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)測(cè)和控制。蘇州離心管使用方法
超濾離心管也可用于從血漿或尿液中提取蛋白質(zhì)和核酸等大分子化合物,。蘇州高離心力離心管排行榜
超濾離心管應(yīng)用:除鹽,、滲濾或更換緩沖液;濃縮含有抗原,、抗體,、酶、核酸(單株或雙株 DNA/RNA 樣本),、微生物、洗出液和凈化樣本的生物樣本,;凈化組織培養(yǎng)基提取液和細(xì)胞溶解液中的大分子成分,,從反應(yīng)混合液中去除引物、連接或分子標(biāo)記,,在 HPLC 之前去除蛋白質(zhì),。產(chǎn)品組成:超濾離心管包括一個(gè)蓋子、一個(gè)過濾器和一個(gè)離心管,。產(chǎn)品特點(diǎn):較高的樣品回收率 (> 90% 的樣品回收率 ),;垂直膜的設(shè)計(jì)減少濃縮所用時(shí)間(10-15分鐘);經(jīng)過嚴(yán)格的泄漏測(cè)試,;無 DNase,、RNase,無熱原,、無內(nèi)元素,。使用這個(gè)超濾管,廠家強(qiáng)調(diào)一定是一次性的,,這個(gè)超濾管必須只能使用一次,,不能重復(fù)使用,!蘇州高離心力離心管排行榜