超濾離心管的分子量選擇:按照樣品量和目標分子量選擇適當?shù)某瑸V離心管,,為了得到較高的收率,,所選濾膜的截留分子量MWCO建議選擇所需截留分子大小的1/3左右,,不超過目標分子量的一半,。因為超濾膜上孔徑是平均孔徑,,膜上的孔并非均勻,離心高壓下也可能滲漏,,因此截留孔徑越小,,流速越慢但截留比例更大。如果樣本濃度低體積大,,可選擇較小容積的超濾管多次重復加樣離心,。如果同時需要脫鹽和去除可溶小分子雜質,可將待濃縮樣品稀釋到超濾管較大容積再離心,,重復2次可除去99%鹽,。避免過長時間或者過速離心,雖然優(yōu)良品質的產(chǎn)品都有防死端設計,,可避免過度離心造成膜表面干而造成不可逆吸附,。避免過度濃縮,體積越小,,越容易因表面吸附而損失得率,。離心后用Tips輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液,必要時補加一定體積的緩沖液沖洗膜表面,,有助于減少膜表面吸附,,能提高回收率。盡量避免Tips接觸膜表面,。超濾離心管通常由聚碳酸酯等材料制成,,可承受高速旋轉和高溫高壓。四川再生纖維素離心管供應商
超濾是大分子脫鹽,、濃縮較方便的方法,,重復性好,得率有保障,已經(jīng)在蛋白,、抗體,、病毒、核酸,、囊泡等樣品制備中建立標準操作,;在目前大熱的外泌體制備中也已經(jīng)成為主流方法。超濾管采用離心方式快速處理樣品,,是很多科研小伙伴們每天要用到的基本裝備,。但是,在默克生命科學團隊推出超濾管中文說明書(AU0.5/4/15)之前,,我們發(fā)現(xiàn)近90%的使用者在選擇和使用過程中因為缺乏必要信息而沒有獲得較佳體驗,,更重要的是,寶貴的樣本會遭受本可避免的損失,!如果目的蛋白是120kDa,,請問應該選擇的超濾管規(guī)格是100k,50k,,還是30k甚至10k,?你采用的是1/2,1/3抑或1/6算法,?這些沒有統(tǒng)一的說法,,是因為不同廠家的膜的截留分子量的定義不同。四川再生纖維素離心管供應商超濾離心管在醫(yī)學圖像學中也具有重要意義,,如MRI掃描,、CT檢查等領域。
超濾離心管使用方法和注意事項:1,、選擇合適的超濾離心管,,主要考慮MWCO和濃縮體積,通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3,,比如目的蛋白分子量為35kDa,,就可以選擇10kDa截留分子量的超濾離心管。若目的蛋白分子量為10kD左右,,則可以用截留分子量3kD的超濾離心管,。2、新買來的超濾是干燥的,,使用前加入MilliQ水,,水量完全過膜,冰浴或冰箱里預冷幾分鐘,。然后將水倒出,,即可加入蛋白液,,加入的多少,以不超過管頂?shù)陌拙€為準,。操作要輕,,加入蛋白液前,超濾離心管需要插在冰上預冷,。3,、質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,,否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾(離心機預冷至4度),。不同離心機的轉速rpm換算成g之后,,有所不同。離心機的加速度調至低檔,,減小對膜的壓力,。注意,一定要等離心機達到目的轉速之后,,方可離開離心機,,否則離心機出問題時,無法*時間處理,,后果不可預測,!
實驗室常用的離心管有塑料的和玻璃的,一般塑料的用得較多,,因為玻璃的離心管不能用在高速或者超速離心機上,。塑料的離心管又有PC (聚碳酸酯)、PE (聚乙烯),、PP(聚丙烯)等材質,。PP的管子性能相對來說比較好。塑料的離心管透明或者半透明,,可以直觀地看到樣品的離心情況,,但是比較容易變形,抗有機溶劑的腐蝕性較差,,所以使用壽命較短,。因此,實驗室一般會經(jīng)常購買離心管,。PC (聚碳酸酯):透明度較好,,硬度大,可以高溫消毒,,但不耐強酸強堿以及一些有機溶劑如酒精之類,。主要用于5萬轉以上的超高速離心,。PE(聚乙烯):不透明。和丙銅,、醋酸,、鹽酸等不反應,較為穩(wěn)定,,高溫下容易變軟,。PP(聚丙烯):半透明,化學及溫度穩(wěn)定性較好,,但是在低溫下會變脆,,所以在離心時不要在4℃以下。超濾離心管可以有效地去除溶液中的雜質,,使樣品更純凈,。
一般來說,我們較常用的離心管就是塑料離心管,,塑料離心管的優(yōu)缺點也很明顯,,優(yōu)點是它的硬度較小,可以利用穿刺法來得到我們需要的物質,。但這也正是它的缺點,,因為硬度小,所以它也更容易變形,,抗腐蝕性也差,,所以它的壽命是比較短的。塑料離心管的還可以按照材質來選擇,,分別有聚乙烯(PE),,聚碳酸酯(PC),聚丙烯(PP)這三種材質,。一般大規(guī)模的實驗室都是將塑料離心管做一次性使用,,但一般的實驗室還是會循環(huán)使用,不推薦循環(huán)使用,,因為這樣會造成實驗結果的不準確性,,但如果非要做循環(huán)使用的話小編還是建議使用pp材質的離心管,然后經(jīng)過高壓高溫進行消毒,,pp材質是上述三種材質中較好的,,所以在選擇的時候我們盡量選擇pp材質的離心管。超濾離心管還可以用于提取DNA,、RNA等核酸分子,,并在基因工程和生物技術中發(fā)揮重要作用。四川再生纖維素離心管供應商
超濾離心管還可用于檢測空氣樣本中的微粒子,、有機化合物等污染物,,并進行空氣質量監(jiān)測和控制,。四川再生纖維素離心管供應商
多肽超濾離心管,垂直設計和有效的膜表面積提供了快速的樣品處理,,較高的樣品回收率(> 90% 的樣品回收率),,以及 80~100 倍濃縮的能力。濃縮物使用吸液器從過濾裝置中收集,,而超濾液則在提供的離心管中收集,。超濾離心管是一種可以為蛋白質樣本的濃縮和緩沖交換提供可靠準確結果的一次性超濾離心式過濾裝置,與層析,、透析等方法相比,,超濾對被處理的分子更加溫和,不需要有機萃取,,不會導致蛋白變性,,且簡單高效。規(guī)格超濾濃縮器可處理體積4mL 以內(nèi)的樣本,,離心管內(nèi)包含一個內(nèi)置豎直的聚醚砜(PES)膜過濾裝置,聚醚砜膜具備低蛋白附著,、高通量的特點,,可應用在3KD、5KD,、10KD,、30KD、50KD,、100KD 六種不同的截留分子量中,。截留分子量標識和體積刻度蝕刻在濃縮器的側面便于識別。四川再生纖維素離心管供應商