絕大多數(shù)聚合酶鏈反應(yīng)方法依賴于熱循環(huán)。熱循環(huán)將反應(yīng)物暴露于加熱和冷卻的重復(fù)循環(huán)中,，以允許不同的溫度依賴性反應(yīng)——具體地說(shuō),，脫氧核糖核酸融化和酶-驅(qū)動(dòng)DNA復(fù)制。聚合酶鏈反應(yīng)使用兩種主要試劑-引物(引物是短的單鏈DN段,，稱為寡核苷酸,，是目標(biāo)DNA區(qū)域的互補(bǔ)序列)和DNA聚合酶。在PCR反應(yīng)的步,，DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的兩條鏈在高溫下物理分離,，這個(gè)過(guò)程稱為脫氧核糖核酸變性。第二步，降低溫度,，引物與互補(bǔ)的脫氧核糖核酸序列結(jié)合,。這兩條DNA鏈就變成了模板，以酶促的方式從構(gòu)成DNA的自由核苷酸中組裝出一條新的DNA鏈,。隨著聚合酶鏈反應(yīng)的進(jìn)行,，產(chǎn)生的DNA本身被用作復(fù)制的模板，啟動(dòng)了一個(gè)連鎖反應(yīng),，原始的DNA模板是以指數(shù)形式放大,。PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克水平,。廈門血液數(shù)字PCR方案

聚合酶鏈反應(yīng)允許快速生產(chǎn)短DN段,，即使已知的引物序列不超過(guò)兩個(gè)。聚合酶鏈反應(yīng)的這種能力增強(qiáng)了許多方法,，例如生成雜交 探針用于 Southern 或northern blot 雜交,。聚合酶鏈反應(yīng)為這些技術(shù)提供了大量的純DNA，有時(shí)是單鏈的,，甚至可以從非常少量的起始材料中進(jìn)行分析,。脫氧核糖核酸測(cè)序的任務(wù)也可以通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)來(lái)輔助完成。已知的DN段可以很容易地從患有遺傳疾病突變的患者體內(nèi)產(chǎn)生,。對(duì)擴(kuò)增技術(shù)的修飾可以從完全未知的基因組中提取片段,，或者可以產(chǎn)生感興趣區(qū)域的單鏈。聚合酶鏈反應(yīng)有許多應(yīng)用于傳統(tǒng)的 DNA克隆,。它可以從更大的基因組中提取片段以插入載體,，這可能只有少量可用。使用一組“載體引物”,，它還可以分析或提取已經(jīng)插入載體的片段,。聚合酶鏈反應(yīng)方案的一些改變可以產(chǎn)生突變(通用的或定點(diǎn)的)插入片段。深圳細(xì)胞數(shù)字PCR應(yīng)用重疊延伸聚合酶鏈反應(yīng)可以創(chuàng)造特定的長(zhǎng)DNA構(gòu)建體,。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的特點(diǎn)：靈敏度高：PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,，能將皮克(pg=10-12）量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克（μg=-6）水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞,；在病毒的檢測(cè)中,，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位）；在細(xì)菌學(xué)中很小檢出率為3個(gè)細(xì)菌,。簡(jiǎn)便,、快速：PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后,，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng),。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素,，無(wú)放射性污染,、易推廣。純度要求低：不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,，DNA 粗制品及RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液,、體腔液、洗嗽液,、毛發(fā),、細(xì)胞、活組織等DNA擴(kuò)增檢測(cè),。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)：模板的制備,，PCR的模板可以是DNA，也可以是RNA,。模板的取材主要依據(jù)PCR的擴(kuò)增對(duì)象,，可以是病原體標(biāo)本如病毒、細(xì)菌,、菌類等,。也可以是病理生理標(biāo)本如細(xì)胞、血液,、羊水細(xì)胞等,。法醫(yī)學(xué)標(biāo)本有血斑、精斑,、毛發(fā)等,。標(biāo)本處理的基本要求是除去雜質(zhì)，并部分純化標(biāo)本中的核酸,。多數(shù)樣品需要經(jīng)過(guò)SDS和蛋白酶K處理,。難以破碎的細(xì)菌，可用溶菌酶加EDTA處理,。所得到的粗制DNA,，經(jīng)酚、氯仿抽提純化,，再用乙醇沉淀后用作PCR反應(yīng)模板,。許多疾病的未知病因的測(cè)序正在通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)得到解決。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是一種體外迅速擴(kuò)增DN段的技術(shù),，它能以極少量的DNA為模版,，在幾小時(shí)內(nèi)復(fù)制出上百萬(wàn)份的DNA拷貝,。DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下,，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),，DNA在高溫時(shí)由于兩條鏈之間的氫鍵被破壞也可以發(fā)生變性解鏈,，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)形成為雙鏈。因此,，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶,、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制,。但是，DNA聚合酶在高溫時(shí)會(huì)失活,，因此,，每次循環(huán)都得加入新的DNA聚合酶，不但操作煩瑣,，而且價(jià)格昂貴,，制約了PCR技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展。發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義,，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷,、同時(shí)也降低了成本,，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床,。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中的DMSO,、甘油等，主要用來(lái)保持酶的活性和幫助DNA解除纏繞結(jié)構(gòu),。深圳細(xì)胞數(shù)字PCR應(yīng)用

現(xiàn)在有些PCR因?yàn)閿U(kuò)增區(qū)很短,，即使Taq酶活性不是很好也能在很短的時(shí)間內(nèi)復(fù)制完成。廈門血液數(shù)字PCR方案

序列標(biāo)簽站點(diǎn)是一個(gè)過(guò)程,，其中PCR被用作基因組的特定片段存在于特定克隆中的指示物,。人類基因組計(jì)劃發(fā)現(xiàn)這一應(yīng)用對(duì)于繪制他們測(cè)序的粘粒克隆以及協(xié)調(diào)不同實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果至關(guān)重要,。聚合酶鏈反應(yīng)的一個(gè)令人興奮的應(yīng)用是對(duì)來(lái)自遠(yuǎn)古來(lái)源的DNA進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析,，例如在尼安德特人的復(fù)原骨骼中、從猛犸的冷凍組織中或從埃及木乃伊的大腦中發(fā)現(xiàn)的DNA已經(jīng)被放大和測(cè)序,。]在某些情況下,，這些來(lái)源的高度降解的DNA可能在擴(kuò)增的早期階段重新組裝,。聚合酶鏈反應(yīng)的一個(gè)常見應(yīng)用是對(duì)以下基因表達(dá)模式的研究。組織(甚至單個(gè)細(xì)胞)可以在不同階段進(jìn)行分析,，以了解哪些基因變得活躍,，哪些基因被關(guān)閉。該應(yīng)用還可以使用定量聚合酶鏈反應(yīng)來(lái)定量表達(dá)的實(shí)際水平,。廈門血液數(shù)字PCR方案