聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的試驗(yàn)污染：陽(yáng)性對(duì)照：在建立PCR反應(yīng)實(shí)驗(yàn)室及一般的檢驗(yàn)單位都應(yīng)設(shè)有PCR陽(yáng)性對(duì)照,，它是PCR反應(yīng)是否成功,、產(chǎn)物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個(gè)重要的參考標(biāo)志。陽(yáng)性對(duì)照要選擇擴(kuò)增度中等,、重復(fù)性好,，經(jīng)各種鑒定是該產(chǎn)物的標(biāo)本，如以重組質(zhì)粒為陽(yáng)性對(duì)照,，其含量宜低不宜高（100個(gè)拷貝以下）,。但陽(yáng)性對(duì)照尤其是重組質(zhì)粒及高濃度陽(yáng)性標(biāo)本，其對(duì)檢測(cè)或擴(kuò)增樣品污染的可能性很大,。因而當(dāng)某一PCR試劑經(jīng)自己使用穩(wěn)定,，檢驗(yàn)人員心中有數(shù)時(shí)，在以后的實(shí)驗(yàn)中可免設(shè)陽(yáng)性對(duì)照,。陰性對(duì)照：每次PCR實(shí)驗(yàn)務(wù)必做陰性對(duì)照,。它包括：標(biāo)本對(duì)照：被檢的標(biāo)本是血清就用鑒定后的正常血清作對(duì)照,；被檢的標(biāo)本是組織細(xì)胞就用相應(yīng)的組織細(xì)胞作對(duì)照。試劑對(duì)照：在PCR試劑中不加模板DNA或RNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,，以監(jiān)測(cè)試劑是否污染,。流聚合酶鏈反應(yīng)：一種偽等溫PCR方法。廣州骨頭數(shù)字PCR

聚合酶鏈反應(yīng)也可以用作以下敏感試驗(yàn)的一部分組織分型,，對(duì)移植至關(guān)重要,。截至2008年，甚至有人提議用聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)取代傳統(tǒng)的血型抗體檢測(cè),。許多形式的病癥涉及致病基因的改變,。通過(guò)使用基于聚合酶鏈反應(yīng)的測(cè)試來(lái)研究這些突變，醫(yī)治方案有時(shí)可以根據(jù)患者的不同而不同,。聚合酶鏈反應(yīng)可以早期診斷惡性疾病,，如白血病和淋巴瘤，這是目前病癥研究中發(fā)展很快的,，并且已經(jīng)被常規(guī)使用,。PCR檢測(cè)可以直接在基因組DNA樣品上進(jìn)行，以檢測(cè)易位特異性惡性細(xì)胞,，其靈敏度至少是其他方法的10,，000倍。聚合酶鏈反應(yīng)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域非常有用,，因?yàn)樗试S分離和擴(kuò)增病癥抑制劑,。例如，定量PCR可以用于量化和分析單細(xì)胞,，以及識(shí)別DNA,、mRNA和蛋白質(zhì)的確認(rèn)和組合。南通組織PCR檢測(cè)技術(shù)原理及步驟聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)中要確保反應(yīng)緩沖液融化完全并徹底混勻,。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)：DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑,。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈，在DNA聚合酶的參與下,，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子拷貝,。在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈,，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈,。因此，通過(guò)溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性,，加入設(shè)計(jì)引物,，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。但是,，DNA聚合酶在高溫時(shí)會(huì)失活,，因此，每次循環(huán)都得加入新的DNA聚合酶,，不但操作煩瑣,，而且價(jià)格昂貴，制約了PCR技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展,。耐熱DNA聚合酶-Taq酶的發(fā)現(xiàn)對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,，不需要每個(gè)循環(huán)加酶,，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也降低了成本,，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用,，并逐步應(yīng)用于臨床。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)：1976年,，中國(guó)科學(xué)家,，發(fā)現(xiàn)了穩(wěn)定的Taq DNA聚合酶，為PCR技術(shù)發(fā)展也做出了基礎(chǔ)性貢獻(xiàn),。PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈,，低溫（經(jīng)常是60°C左右）時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合，標(biāo)本核酸模板在提取過(guò)程中,，由于吸樣污染導(dǎo)致標(biāo)本間污染,；有些微生物標(biāo)本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴(kuò)散再調(diào)溫度至DNA聚合酶很適反應(yīng)溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈,?；诰酆厦钢圃斓腜CR儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設(shè)備，能在變性溫度,，復(fù)性溫度,，延伸溫度之間很好地進(jìn)行控制。PCR由變性-退火-延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成,。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)是80年代中期發(fā)展起來(lái)的體外核酸擴(kuò)增技術(shù),。工具/原料：擴(kuò)增緩沖液，四種dNTP,，引物,，模板DNA，Taq DNA聚合酶,， Mg離子,，蒸餾水。模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,，使之成為單鏈,，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備,；模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合,；引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下,，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板,，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理,，合成一條新的與模板DNA 鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈。重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過(guò)程,，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”,，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)準(zhǔn)備：PCR所用的酶主要有兩種來(lái)源：Taq和Pfu,，分別來(lái)自兩種不同的噬熱菌,。廣州骨頭數(shù)字PCR

聚合酶鏈反應(yīng)具有定量合成產(chǎn)物的優(yōu)點(diǎn)。廣州骨頭數(shù)字PCR

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的常見(jiàn)問(wèn)題：Mg2+濃度：Mg2+離子濃度對(duì)PCR擴(kuò)增效率影響很大,，濃度過(guò)高可降低PCR擴(kuò)增的特 異性,，濃度過(guò)低則影響PCR擴(kuò)增產(chǎn)量甚至使PCR擴(kuò)增失敗而不出擴(kuò)增條帶。反應(yīng)體積的改變：通常進(jìn)行PCR擴(kuò)增采用的體積為20ul,、30ul,、50ul?；?00ul,，應(yīng)用多 大體積進(jìn)行PCR擴(kuò)增，是根據(jù)科研和臨床檢測(cè)不同目的而設(shè)定,，在做小體積如20ul 后,，再做大體積時(shí)，一定要模索條件,，否則容易失敗,。物理原因：變性對(duì)PCR擴(kuò)增來(lái)說(shuō)相當(dāng)重要，如變性溫度低,，變性時(shí)間短,，極有可能出現(xiàn)假陰性；退火溫度過(guò)低,，可致非特異性擴(kuò)增而降低特異性擴(kuò)增效率退火溫度過(guò)高影響引物與模板的結(jié)合而降低PCR擴(kuò)增效率,。有時(shí)還有必要用標(biāo)準(zhǔn)的溫度計(jì),，檢測(cè)一下擴(kuò)增儀或水溶鍋內(nèi)的變性、退火和延伸溫度,，這也是PCR失敗的原因之一,。廣州骨頭數(shù)字PCR