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蕪湖細胞生物學膜片鉗技術研究方案

來源: 發(fā)布時間:2023-03-23

腦片膜片鉗實驗全細胞記錄:用可視化膜片鉗尋找清楚,、且表面光滑,、折光性較好的突觸后神經(jīng)元,。在加了正壓后,將記錄電極移入腦片視野中,,并接近事先選好的神經(jīng)元,然后,調整電極與神經(jīng)元的相對位置,,利用負壓形成穩(wěn)定的高阻封接,。用短簇的脈沖負壓使細胞破膜,穩(wěn)定2~3分鐘,,觀察封接測試波形起始段與基線間的差值是否在100pA以內,,封接電阻是否大于200M,如果是,,且較穩(wěn)定,,再迅速補償串聯(lián)電阻和慢電容,舍棄串聯(lián)電阻大于30M的細胞,,且在記錄過程中監(jiān)測串聯(lián)電阻的變化,,當變化大于20%時,中止記錄,。如果細胞狀態(tài)不好,,就馬上重新制備腦片,以提高實驗效率,。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術指標:實驗迅速,,通量高。一般每天可達到50個實驗數(shù)據(jù)左右,。蕪湖細胞生物學膜片鉗技術研究方案

蕪湖細胞生物學膜片鉗技術研究方案,膜片鉗電生理技術服務

膜片鉗技術發(fā)展至今,,已經(jīng)成為現(xiàn)代細胞電生理的常規(guī)方法,它不只可以作為基礎生物醫(yī)學研究的工具,,而且直接或間接為臨床醫(yī)學研究服務,,目前膜片鉗技術普遍應用于神經(jīng)(腦)科學、心血管科學,、藥理學,、細胞生物學、病理生理學,、中醫(yī)藥學,、植物細胞生理學、運動生理等多學科領域研究,。隨著全自動膜片鉗技術(Automaticpatchclamptechnology)的出現(xiàn),,膜片鉗技術因其具有的自動化、高通量特性,,在藥物研發(fā),、藥物篩選中顯示了強勁的生命力。福州藥理學膜片鉗成像應用在大多數(shù)膜片鉗實驗,,要求所有實驗儀器及設備均具有良好的機械穩(wěn)定性,。

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膜片鉗實驗常見問題及解決方法:膜片鉗實驗難度大,、技術要求高,要掌握有關技術和方法雖不是很困難的事,,但要從一大批的實驗數(shù)據(jù)中,,經(jīng)過處理和分析,得出有意義,、有價值的結果和結論,,就顯得不那么容易,有許多需要注意和考慮的問題,,包括減少噪音,,避免電極前端的污染,提高封接成功率,,具體實驗過程中還需要考慮如何選取記錄模式,,為記錄特定離子電流如何選擇電極內、外液,,如何選擇阻斷劑,、激動劑,如何進行正確的數(shù)據(jù)采集等許多更為復雜的問題,,還需在科研實踐中不斷地探索和解決,。

膜片鉗技術的工作原理:膜片鉗技術是用于了解離了通道行為的通用型電生理工具,首先用微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細胞膜,,然后以千兆歐姆以上的阻抗使電極尖銳端與細胞膜封接,,通過吸破或者電破的方式使與電極尖開口處相接的細胞膜的小區(qū)域與其周圍區(qū)域在電學上分隔,然后細胞膜破裂,,進而對此區(qū)域上的離子通道的離子電流進行監(jiān)測記錄的方法,。該方法普遍應用于神經(jīng)細胞,肌纖維細胞,,心肌細胞及高表達單一通道的卵母細胞,。主要用于監(jiān)測離子通道在正常或者疾病狀態(tài)下如何表現(xiàn),,以及不同藥物,、離子或其他分析物如何改變這些狀態(tài)。膜片鉗技術的建立,,對生物科學特別是神經(jīng)科學是一項具有重大意義的變革。這是一種通過離子通道記錄的離子電流來反映細胞膜單一的(或多個)的離子通道活動的技術,。該技術的出現(xiàn)將生理學的細胞水平和分子水平聯(lián)系在一起,,又將神經(jīng)科學的不同亞科融匯在一起,促進了各個學科之間的聯(lián)系,,加速了我們神經(jīng)科學的研究進展,,深入探討神經(jīng)活動的機制研究。膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質分子對相應離子通透難易程度等特性的一種實驗技術。

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膜片鉗在通道研究中的重要作用:利用膜片鉗技術還可以用于藥物在其靶受體上作用位點的分析,。如神經(jīng)元煙堿受體為配體門控性離子通道,,膜片鉗全細胞記錄技術通過記錄煙堿誘發(fā)電流,可直觀地反映出神經(jīng)元煙堿受體活動的全過程,,包括受體與其激動劑和拮抗劑的親和力,,離子通道開放、關閉的動力學特征及受體的失敏等活動,。使用膜片鉗全細胞記錄技術觀察拮抗劑對煙堿受體激動劑量效曲線的影響,,來確定其作用的動力學特征。然后根據(jù)分析拮抗劑對受體失敏的影響,,拮抗劑的作用是否有電壓依賴性,、使用依賴性等特點,可從功能上區(qū)分拮抗劑在煙堿受體上的不同作用位點,,即判斷拮抗劑是作用在受體的激動劑識別位點,,離子通道抑或是其它的變構位點上。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術指標:藥液交換迅速,。細胞內,、外液的交換是在平面芯片上進行。合肥醫(yī)學膜片鉗全細胞記錄供應商

全自動膜片鉗系統(tǒng)技術指標:操作簡單,,全過程可自動化,。蕪湖細胞生物學膜片鉗技術研究方案

膜片鉗使用的注意事項:1.為了防止塵埃、靜電傷害機器,,每天做實驗前請用清水拖地,。2.拉制儀使用前需預熱15-30min。3.銀絲電極及地線發(fā)白時,,請先用砂紙輕微打磨,,再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀,如果銀絲電極30min未變黑,,則考慮更換次氯酸鈉,。4.先開放大器,后開軟件,;先關軟件,,后關放大器。5.非必須用到汞燈時請不要打開汞燈電源,,打開后至少需1個小時才可關閉,。6.在放大器打開時不能用手、金屬物品或其它導電的物品接觸電極絲(包括地線),,在取放細胞片時請關閉放大器,。膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,,因此封接范圍內細胞膜光有少數(shù)離子通道,。膜片鉗使用的注意事項:為了防止塵埃、靜電傷害機器,,每天做實驗前請用清水拖地,。蕪湖細胞生物學膜片鉗技術研究方案

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