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來源: 發(fā)布時間:2023-03-27

膜片鉗使用的注意事項:1.為了防止塵埃、靜電傷害機器,,每天做實驗前請用清水拖地,。2.拉制儀使用前需預熱15-30min。3.銀絲電極及地線發(fā)白時,,請先用砂紙輕微打磨,,再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀,如果銀絲電極30min未變黑,,則考慮更換次氯酸鈉,。4.先開放大器,,后開軟件;先關軟件,,后關放大器,。5.非必須用到汞燈時請不要打開汞燈電源,打開后至少需1個小時才可關閉,。6.在放大器打開時不能用手,、金屬物品或其它導電的物品接觸電極絲(包括地線),在取放細胞片時請關閉放大器,。膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,,因此封接范圍內細胞膜光有少數(shù)離子通道,。膜片鉗使用的注意事項:換液時應時刻觀察浴槽,防止液面過低或液體溢出污染鏡頭,。杭州神經生物學膜片鉗電生理技術網(wǎng)站

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膜片鉗在通道研究中的重要作用:應用膜片鉗技術可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時程,、區(qū)分離子通道的離子選擇性、同時可發(fā)現(xiàn)新的離子通道及亞型,,并能在記錄單細胞電流和全細胞電流的基礎上進一步計算出細胞膜上的通道數(shù)和開放概率,,還可以用以研究某些胞內或胞外物質對離子通道開閉及通道電流的影響等。同時用于研究細胞信號的跨膜轉導和細胞分泌機制,。結合分子克隆和定點突變技術,,膜片鉗技術可用于離子通道分子結構與生物學功能關系的研究。福州神經生物學膜片鉗原理膜片鉗使用的注意事項:玻璃微電極需先用甲醇浸泡,,再用酒精燈微燒兩端,,使其平滑。

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膜片鉗技術的基本原理和方法:膜片鉗使用的基本方法是,,把經過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下,,與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接,導致電極內膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來,,由于電性能隔離與微電極的相對低電阻(1~5MΩ)只要對微電極施以電壓就能對膜片進行鉗制,,從微電極引出的微小離子電流通過高分辨、低噪聲,、高保真的電流-電壓轉換放大器輸送至電子計算機進行分析處理,。膜片鉗技術實現(xiàn)的關鍵是建立高阻抗封接,并能通過特定的記錄儀器反映這些變化,。

膜片鉗電生理技術服務記錄的幾種形式:全細胞記錄構型(whole-cell recording) 高阻封接形成后,,繼續(xù)以負壓抽吸使電極管內細胞膜破裂,電極胞內液直接相通,而與浴槽液絕緣,,這種形式稱為“全細胞”記錄,。它既可記錄膜電位又可記錄膜電流。其中膜電位可在電流鉗情況下記錄,,或將玻管連到標準高阻微電極放大器上記錄,。在電壓鉗條件下記錄到的大細胞全細胞電流可達nA級,全細胞鉗的串聯(lián)電阻(玻管和細胞內部之間的電阻)應當補償,。任何流經膜的電流均流經這一電阻,,所引起的電壓降將使玻管電壓不同于細胞內的真正電位。電流愈大,,愈需對串聯(lián)電阻進行補償,。膜片鉗技術的應用范圍:對單細胞形態(tài)與功能關系的研究,。

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膜片鉗使用的基本方法是,,把經過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下,與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接,,導致電極內膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來,,由于電性能隔離與微電極的相對低電阻(1~5MΩ),只要對微電極施以電壓就能對膜片進行鉗制,,從微電極引出的微小離子電流通過高分辨,、低噪聲、高保真的電流-電壓轉換放大器輸送至電子計算機進行分析處理,。膜片鉗技術實現(xiàn)的關鍵是建立高阻抗封接,,并能通過特定的記錄儀器反映這些變化,因而,,膜片鉗實驗室除了一般電生理實驗所需的儀器外,,還特需防震工作臺、屏蔽罩,、膜片鉗放大器,、三維液壓操縱器、倒置顯微鏡,、數(shù)據(jù)采集卡,、數(shù)據(jù)記錄和分析系統(tǒng)等。膜片鉗技術的應用范圍:對離子通道生理與病理作用機制的研究,。南京全自動離子通道研究方案

膜片鉗使用操作注意:禁止私拉電線,,如有實驗要求可與老師及時溝通。杭州神經生物學膜片鉗電生理技術網(wǎng)站

膜片鉗技術之全細胞記錄的優(yōu)點:與傳統(tǒng)的細胞內記錄相比,,全細胞記錄也有很多好處,,比如電極尖銳端開口較大,電阻只2~20MΩ,易于進行電壓/電流鉗制,,噪聲很大程度下降,,電極電壓降也變得很小,補償非常容易,。與單通道記錄相比,,單通道記錄無法獲得整個細胞的功能變化信息,而全細胞記錄(尤其是腦片或在體記錄)所獲信息則能反映細胞功能(甚至細胞之間信息傳遞)的改變,,加之易于更換細胞外液,,所以,全細胞記錄更適用于對離子通道的藥理學研究,,即加各種通道blocker啦,,激動劑啦之類的。杭州神經生物學膜片鉗電生理技術網(wǎng)站

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