多克隆抗體免疫動物:抗體的效價鑒定 不管是用于診斷還是用于調理,,制備抗體的目的都是要求較高效價,。不同的抗原制備的抗體,,要求的效價不一。鑒定效價的方法很多,,包括有試管凝集反應、瓊脂擴散試驗,、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)等,。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,,以資比較。如制備抗抗體的效價,,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定,。抗體的特異性鑒定 抗體的特異性是指與相應抗原或近似抗原物質的識別能力,??贵w的特異性高,它的識別能力就強,。衡量特異性通常以交叉反應率來表示,。交叉反應率可用競爭抑制試驗測定。不同的抗體可以針對不同的病原體,,形成免疫記憶以應對未來的傳染,。成都同種抗體補給公司
多克隆抗體免疫動物:免疫劑量與注射途徑有關,一般而言,,靜脈注射劑量大于皮下注射,,而皮下注射又比掌內和跖內皮下注射劑量大,也可采用淋巴結內注射法,。加佐劑比不加佐劑的注射劑量要小,,對家兔而言,采用弗氏完全佐劑,,則需注射 0.5mg~1mg/kg./次,,如采用弗氏不完全佐劑則注射劑量應大10 倍以上。如要制備高度特異性的抗血清,可選用低劑量抗原短程免疫法,。如需要獲得高效價的抗血清,,宜采用大劑量長程免疫法。免疫周期長者,,可少量多次,。免疫周期短者,應大量少次,。 兩次注射的間隔時間應長短適宜,太短起不到再次反應的效果太長則失去了前一次激發(fā)的敏感作用,。一般間隔時間應為 5~7 天,加佐劑者應為 2 周左右,。 注射的 Ig 純度高,,則一般不易引起過敏反應,如注射血清,,即使是少量,,在再次免疫時,極易引起過敏反應,,所以一定要采取措施,。杭州同種抗體基因抗體的親和力決定了其與抗原結合的強度,,高親和力的抗體能更有效地中和病原體。
抗體主要功能:啟動補體產生攻膜復合物使細胞溶解破壞,。人IgG1~3和IgM與相應抗原結合后,,可因構象改變而使其CH2和CH3結構域內的補體結合點暴露,從而通過經典途徑啟動補體系統(tǒng),,產生多種效應功能,,其中IgM、IgG1和IgG3啟動補體系統(tǒng)的能力較強,,IgG2較弱,。IgA、IgE和IgG4本身難以啟動補體,,但在形成聚合物后可通過旁路途徑啟動補體系統(tǒng),。通常情況下,lgD不能啟動補體,。調理吞噬和ADCC,。IgG可通過其Fc段與表面具有相應受體的細胞結合,產生不同的生物學作用,。
抗體特性和功能:IgG于出生后3個月開始合成,,3~5歲接近成人水平。IgG是血清和體液中含量很高的抗體,,占血清總Ig的75%~80%,。人lgG有4個亞類,根據(jù)其在血清中濃度的高低排序,,分別為IgG1,、IgG2、IgG3,、IgG4,。IgG的半衰期為20~23天,是再次免疫應答產生的主要抗體,,其親和力高,,在體內分布普遍,具有重要的免疫效應,,是機體抗傳染的“主力軍”,。IgG1、IgG2和IgG3可以穿過胎盤屏障,,在新生兒抗傳染免疫中起重要作用,。IgG1、lgG2和IgG3能通過經典途徑活化補體,,并可與巨噬細胞,、NK細胞表面Fc受體結合,,發(fā)揮調理作用、ADCC作用等,;人IgGl、IgG2和IgG4可通過其Fc段與葡萄球菌蛋白A(SPA)結合,,借此可純化抗體,,并用于免疫診斷。某些自身抗體如抗甲狀腺球蛋白抗體,、抗核抗體,,以及引起Ⅱ、Ⅲ型超敏反應的抗體也屬于IgG,。多克隆抗體是由多個不同的B細胞產生的抗體,,具有普遍的特異性。
抗體可變區(qū)和恒定區(qū):可變區(qū) 重鏈和輕鏈的V區(qū)分別稱為VH和VL,。VH和VL中各含有3個氨基酸組成和排列順序高度可變的區(qū)域,,稱為高變區(qū)(hypervariable region,HVR)或互補決定區(qū)(complementarity determining region,,CDR),, 包括HVR1(CDR1)、HVR2(CDR2)和HVR3(CDR3),,其中,,HVR3(CDR3)變化程度更高。VH的3個高變區(qū)分別位于29~31,、49~58和95~102位氨基酸,,而VL的3個高變區(qū)分別位于28~35、49~56和91~98位氨基酸,。VH和VL的3個CDR共同組成Ig的抗原結合部位(antigen-binding site),,決定抗體的特異性,是抗體識別及結合抗原的部位,。在V區(qū)中,,CDR之外區(qū)域的氨基酸組成和排列順序相對保守,稱為骨架區(qū)(framework region,,F(xiàn)R),。VH或VL各有四個骨架區(qū),分別用FR1,、FR2,、FR3和FR4表示。重組抗體技術使得科學家能夠定制和改良抗體,,以應對不同的疾病挑戰(zhàn),。安徽同種抗體試劑
抗體工程可以通過改變抗體的結構和特性來提高其療效和穩(wěn)定性,。成都同種抗體補給公司
抗體基本結構:天然Ig分子含有四條異源性多肽鏈,其中,,分子量較大的兩條鏈稱為重鏈(heavy chain,,H),而分子量較小的兩條鏈稱為輕鏈(Light chain,,L),。同一Ig分子中的兩條H鏈和兩條L鏈的氨基酸組成完全相同。重鏈分子量為50 000~75 000,,由450~550個氨基酸殘基組成,。重鏈恒定區(qū)的氨基酸組成和排列順序不同,其抗原性也不同,。據(jù)此,,可將抗體分為5類(class),即IgM,、IgD,、IgG、IgA和IgE,,其相應的重鏈分別為μ鏈,、δ鏈、γ鏈,、α鏈和ε鏈,。不同類的Ig具有不同的特征,如鏈內和鏈間二硫鍵的數(shù)量和位置,、結構域的數(shù)量及鉸鏈區(qū)的長度等均不完全相同,。成都同種抗體補給公司
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