多克隆抗體佐劑應(yīng)用:1.佐劑的類型 實(shí)踐中常應(yīng)用的佐劑有氫氧化鋁膠,、明礬,、弗氏佐劑、脂質(zhì)體和石蠟油等,。也有采用結(jié)合桿菌等分枝桿菌,、白喉?xiàng)U菌以及細(xì)小棒狀桿菌等。⑴ 弗氏不完全佐劑(incomplete Freund's adjuvant,IFA)羊毛脂 1 份,;石蠟油 5 份,;混合,高壓滅菌后保存,。用時加熱融化,,冷卻至 50℃左右,加抗原進(jìn)行乳化處理。⑵ 弗氏完全佐劑(complete Freund's adjuvant,CFA),;弗氏不完全佐劑 10ml,;卡介苗 10mg~200mg 卡介苗可 100℃10min 滅活處理。初次免疫時,,建議用弗氏完全佐劑,,以刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫反應(yīng)。再次免疫時,,一般不用完全佐劑,,而采用弗氏不完全佐劑。但在研究分枝桿菌及相關(guān)抗原時,,一般不用弗氏完全佐劑,,以免卡介苗的干擾。單克隆抗體是由單一源頭的B細(xì)胞產(chǎn)生的抗體,,具有高度特異性,。湖北富含脯氨酸11抗體
抗體鉸鏈區(qū):鉸鏈區(qū)(hinge region)位于CH1與CH2之間,富含脯氨酸,,易伸展彎曲,,從而改變抗原結(jié)合部位之間的距離,有利于抗體結(jié)合位于不同位置的抗原表位,。鉸鏈區(qū)易被木瓜蛋白酶,、胃蛋白酶等水解,產(chǎn)生不同的水解片段,。不同類Ig的鉸鏈區(qū)不盡相同,,例如人IgGl、IgG2,、IgG4和IgA的鉸鏈區(qū)較短,,IgG3和IgD的鉸鏈區(qū)較長,而IgM和IgE無鉸鏈區(qū),。J鏈和分泌片:Ig輕鏈和重鏈除上述基本結(jié)構(gòu)外,,某些類別的Ig還含有其他輔助成分,如J鏈和分泌片 ,。河南Prestige Antibodies抗體研發(fā)制造抗體在免疫系統(tǒng)中起到了關(guān)鍵作用,,保護(hù)我們免受各種疾病的侵害。
抗原上那部分可以引起機(jī)體產(chǎn)生抗體的分子結(jié)構(gòu),,叫做抗原決定簇,。一個抗原上可以有好幾個不同的抗原決定簇,因而使機(jī)體產(chǎn)生好幾種不同的抗體,,然后產(chǎn)生出抗體是漿細(xì)胞,。只針對一個抗原決定簇起作用的漿細(xì)胞群就是一個純系,,純系的英文為Clone,音譯就是克隆,。由一種克隆產(chǎn)生的特異性抗體叫做單克隆抗體,。單克隆抗體能目標(biāo)明確地與單一的特異抗原決定簇結(jié)合,就象導(dǎo)彈精確地命中目標(biāo)一樣,。另一方面,,即使是同一種抗原決定簇,在機(jī)體內(nèi)也可以由好幾種克隆來產(chǎn)生抗體,,形成好幾種單克隆抗體混雜物,,稱為多克隆抗體。
隨后,,經(jīng)1968年和1972年的世界衛(wèi)生組織和國際免疫學(xué)會聯(lián)合會討論決定,,將具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白統(tǒng)一命名為免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig),。Ig可分為分泌型Ig(secreted Ig,,SIg)和膜型Ig(membrane Ig,mIg),。SIg主要存在于血液和組織液中,,行使抗體的各種功能;mIg主要構(gòu)成B細(xì)胞膜表面的抗原受體,?;窘Y(jié)構(gòu):經(jīng)x線晶體衍射結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn),Ig由四條多肽鏈組成,,各肽鏈之間由數(shù)量不等的鏈間二硫鍵連接,。Ig可形成“Y”字型結(jié)構(gòu),稱為Ig單體,,是構(gòu)成抗體的基本單位,。抗體的多樣性來自于基因重排和突變,,使其能夠識別各種不同的抗原,。
多克隆抗體免疫動物:免疫劑量與注射途徑有關(guān),一般而言,,靜脈注射劑量大于皮下注射,而皮下注射又比掌內(nèi)和跖內(nèi)皮下注射劑量大,,也可采用淋巴結(jié)內(nèi)注射法,。加佐劑比不加佐劑的注射劑量要小,對家兔而言,,采用弗氏完全佐劑,,則需注射 0.5mg~1mg/kg./次,,如采用弗氏不完全佐劑則注射劑量應(yīng)大10 倍以上。如要制備高度特異性的抗血清,可選用低劑量抗原短程免疫法,。如需要獲得高效價的抗血清,,宜采用大劑量長程免疫法。免疫周期長者,,可少量多次,。免疫周期短者,應(yīng)大量少次,。 兩次注射的間隔時間應(yīng)長短適宜,太短起不到再次反應(yīng)的效果太長則失去了前一次激發(fā)的敏感作用,。一般間隔時間應(yīng)為 5~7 天,加佐劑者應(yīng)為 2 周左右,。 注射的 Ig 純度高,,則一般不易引起過敏反應(yīng),如注射血清,,即使是少量,,在再次免疫時,極易引起過敏反應(yīng),,所以一定要采取措施,。特異性抗體可以針對不同的病原體或細(xì)胞表面分子,提供精確的免疫保護(hù),。湖北富含脯氨酸11抗體
抗體的半衰期較長,,可以在體內(nèi)持續(xù)發(fā)揮作用,保持免疫防御的持久性,。湖北富含脯氨酸11抗體
抗原通常是由多個抗原決定簇組成的,,由一種抗原決定簇刺激機(jī)體,由一個B淋巴細(xì)胞接受該抗原刺激所產(chǎn)生的抗體稱之為單克隆抗體(MonoclonalAntibody),。由多種抗原決定簇刺激機(jī)體,,相應(yīng)地就產(chǎn)生各種各樣的單克隆抗體,這些單克隆抗體混雜在一起就是多克隆抗體,,機(jī)體內(nèi)所產(chǎn)生的抗體就是多克隆抗體,;除了抗原決定簇的多樣性以外,同樣一種抗原決定簇,,也可刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG,、IgM、IgA,、IgE和IgD等五類抗體,。抗原刺激機(jī)體,,產(chǎn)生免疫學(xué)反應(yīng),,由機(jī)體的漿細(xì)胞合成并分泌的與抗原有特異性結(jié)合能力的一組球蛋白,,這就是免疫球蛋白,這種與抗原有特異性結(jié)合能力的免疫球蛋白就是抗體,。湖北富含脯氨酸11抗體
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