免疫動物是用目的抗原免疫小鼠,,使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的 過程,。 一般選用6-8周齡雌性BALB/c小鼠,,按照預(yù)先制定的免疫方案進(jìn)行免疫注射,。 抗原通過血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫部位,刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆,,使其活化,、增殖,并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞,。細(xì)胞融合采用二氧化碳?xì)怏w處死小鼠,,無菌操作取出脾臟,在平皿內(nèi)擠壓研磨,,制備脾細(xì)胞懸液,。 將準(zhǔn)備好的同系骨髓瘤細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞按一定比例混合,并加入促融合劑聚乙二醇,。在聚乙二醇作用下,,各種淋巴細(xì)胞可與骨髓瘤細(xì)胞發(fā)生融合,形成雜交瘤細(xì)胞,。單克隆抗體在惡性癥調(diào)理中具有潛在的應(yīng)用價值,。浙江PRR11多克隆抗體
1937年,,Tiselius和Kabat用電泳方法將血清蛋白分為白蛋白,、α1、α2,、β及γ球蛋白等組分,,并發(fā)現(xiàn)抗體主要存在于γ區(qū),,因此抗體又被稱為γ球蛋白,。隨后,經(jīng)1968年和1972年的世界衛(wèi)生組織和國際免疫學(xué)會聯(lián)合會討論決定,,將具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白統(tǒng)一命名為免疫球蛋白(immunoglobulin,,Ig)。Ig可分為分泌型Ig(secreted Ig,,SIg)和膜型Ig(membrane Ig,,mIg)。SIg主要存在于血液和組織液中,,行使抗體的各種功能,;mIg主要構(gòu)成B細(xì)胞膜表面的抗原受體。浙江PRR11多克隆抗體單克隆抗體在流感疫苗的生產(chǎn)中起到了重要作用,。
抗體胃蛋白酶作用于鉸鏈區(qū)二硫鍵所連接的兩條重鏈的近c(diǎn)端,,水解Ig后可獲得一個F(ab’)2片段和一些小片段pFc’。F(ab’)2是由兩個Fab段及鉸鏈區(qū)組成,,由于Ig分子的兩個臂仍由二硫鍵連接,,因此F(ab’)2片段為雙價,可同時結(jié)合兩個抗原表位,,與抗原結(jié)合可發(fā)生凝集反應(yīng)和沉淀反應(yīng),。由于F(ab’)2片段既保留了結(jié)合相應(yīng)抗原的生物學(xué)活性,又避免了Fc段免疫原性可能引起的副作用,,因而被普遍用于制備生物制品,,如白喉抗有害素、破傷風(fēng)抗有害素均是經(jīng)胃蛋白酶消化后精制提純的生物制品,。胃蛋白酶水解Ig后所產(chǎn)生的pFc 7然后被降解,,無生物學(xué)作用 。
抗體規(guī)律:凡能產(chǎn)生抗體的高等動物(包括人類),,當(dāng)注入胸腺依賴性抗原(TD抗原)進(jìn)行免疫時都有著相同產(chǎn)生抗體的規(guī)律,,即存在初次免疫應(yīng)答(primary immune response)和再次免疫應(yīng)答(secondary immune response)。初次免疫應(yīng)答是指機(jī)體初次接觸某種抗原物質(zhì)引起特異性抗體產(chǎn)生的過程,。其特點(diǎn)是潛伏期長(一周以上),,產(chǎn)生的抗體滴度(效價)低,、維持的時間短,產(chǎn)生的抗體以IgM為主,;再次免疫應(yīng)答是指機(jī)體以后再次接觸同樣的抗原后所產(chǎn)生的抗體應(yīng)答過程,。其特點(diǎn)是產(chǎn)生抗體的潛伏期短、抗體滴度高,,維持的時問長,,產(chǎn)生的抗體以IgG為主。非胸腺依賴性抗原(TI抗原)引起的體液免疫由于不產(chǎn)生記憶細(xì)胞,,因此只有初次免疫應(yīng)答,,沒有再次免疫應(yīng)答。多克隆抗體的制備過程通常包括免疫小鼠,、收集細(xì)胞,、混合細(xì)胞液以及純化抗體等步驟。
IgE抗體是人體內(nèi)非常重要的一類免疫球蛋白,,在正常情況下,,其含量是所有免疫球蛋白中很低的一種。但在病理情況下,,如過敏性疾病,,或寄生蟲傳染時,IgE水平可明顯升高,。在過敏性疾病時,,IgE可與致敏原結(jié)合,進(jìn)而再與肥大細(xì)胞,,或嗜堿性粒細(xì)胞表面相應(yīng)的受體結(jié)合,,即可引起上述細(xì)胞脫顆粒,釋放白三烯和組胺類的物質(zhì),,從而引起臨床上過敏反應(yīng),。在寄生蟲傳染時,IgE可與抗原結(jié)合,,進(jìn)而再與嗜酸性粒細(xì)胞表面相應(yīng)的受體結(jié)合,。嗜酸性粒細(xì)胞活化后,通過ADCC的作用,,可對寄生蟲進(jìn)行吞噬,。除外,還有病理情況,,如漿細(xì)胞瘤,,即血液科較常見的多發(fā)性骨髓瘤,可出現(xiàn)IgE水平的升高,,這時應(yīng)完善血尿,、免疫固定電泳,,判斷患者是否存在單克隆增生的免疫球蛋白,除外患者是否有血液系統(tǒng)的疾病,??贵w的產(chǎn)生主要由B細(xì)胞負(fù)責(zé),,它們可以識別并生成特異性的抗體以應(yīng)對傳染,。浙江PRR11多克隆抗體
單克隆抗體可用于針對惡性癥細(xì)胞的免疫調(diào)理。浙江PRR11多克隆抗體
抗體特性和功能:IgM占血清Ig總量的5%~10%,,血清濃度約為1mg/ml,。單體IgM以膜結(jié)合型表達(dá)于B細(xì)胞表面,構(gòu)成B細(xì)胞抗原受體,,只表達(dá)mlgM是未成熟B細(xì)胞的標(biāo)志,。分泌型IgM為五聚體,是分子量很大的Ig,,沉降系數(shù)為19S,,稱為巨球蛋白(macroglobulin),一般不能通過血管壁,,主要存在于血液中,。五聚體IgM含有10個Fab段,具有很強(qiáng)的抗原結(jié)合能力,;含有5個Fc段,,比IgG更易啟動補(bǔ)體。天然血型抗體為IgM,,血型不匹配的輸血,,可導(dǎo)致嚴(yán)重的溶血反應(yīng)。IgM是個體發(fā)育過程中很早合成和分泌的抗體,,在胚胎發(fā)育晚期的胎兒即能產(chǎn)生IgM,,故臍帶血lgM升高提示胎兒有宮內(nèi)傳染(如風(fēng)疹病毒或巨細(xì)胞病毒等傳染)。IgM也是初次體液免疫應(yīng)答中很早出現(xiàn)的抗體,,是機(jī)體抗傳染免疫的“先頭”,;血清中IgM升高,提示新近發(fā)生傳染,,可用于傳染的早期診斷,;浙江PRR11多克隆抗體