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抗體(antibody,Ab):是由抗原進(jìn)入機(jī)體刺激B細(xì)胞分化增殖為漿細(xì)胞而合成并分泌的一類能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合并產(chǎn)生免疫效應(yīng)的含有糖基的球蛋白,??贵w分布于體液(血液、組織液及粘膜的外分泌液)中,,主要存在于血清內(nèi),。1964年世界衛(wèi)生組織召開會(huì)議,將具有抗體活性及化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白統(tǒng)稱為免疫球蛋白(immunoglobulin,,Ig),。免疫球蛋白除分布于體液中之外,還可存在于B細(xì)胞膜上?,F(xiàn)代免疫學(xué)認(rèn)為,,抗體與免疫球蛋白是等同的概念;只是抗體側(cè)重于其生物學(xué)活性的描述,,而免疫球蛋白側(cè)重強(qiáng)調(diào)其化學(xué)結(jié)構(gòu),。單克隆抗體可以用于篩選藥物候選物。北京自身抗體補(bǔ)給公司
選擇性培養(yǎng)的目的是篩選融合的雜交瘤細(xì)胞,,一般采用HAT選擇性培養(yǎng)基,。在HAT培養(yǎng)基中,,未融合的小鼠骨髓瘤細(xì)胞中DNA的從頭合成途徑會(huì)被阻止;未融合的骨髓瘤細(xì)胞又因缺乏次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(HGPRT),,不能利用補(bǔ)救途徑合成DNA,;這樣未融合小鼠骨髓瘤細(xì)胞的兩個(gè)DNA合成途徑都被阻止,骨髓瘤細(xì)胞DNA不能復(fù)制而死亡,。 未融合的B淋巴細(xì)胞雖具有次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,,但其本身不能在體外長期存活也逐漸死亡。 只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從B淋巴細(xì)胞獲得了次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶,,可以通過補(bǔ)救途徑合成DNA,,并具有骨髓瘤細(xì)胞能無限增殖的特性,因此,,雜交瘤細(xì)胞能在HAT培養(yǎng)基中存活和增殖,。武漢新基因PRR11抗體試劑多克隆抗體通常由多個(gè)不同的B細(xì)胞克隆產(chǎn)生,這些細(xì)胞分別產(chǎn)生針對不同抗原的抗體,。
單克隆抗體的大量制備主要采用動(dòng)物體內(nèi)誘生法和體外培養(yǎng)法,。(1)體內(nèi)誘生法取BALB/c小鼠,首先腹腔注射0.5ml液體石蠟或降植烷進(jìn)行預(yù)處理,。1-2周后,,腹腔內(nèi)接種雜交瘤細(xì)胞。雜交瘤細(xì)胞在小鼠腹腔內(nèi)增殖,,并產(chǎn)生和分泌單克隆抗體,。約1-2周,可見小鼠腹部膨大,。用注射器抽取腹水,,即可獲得大量單克隆抗體。(2)體外培養(yǎng)法將雜交瘤細(xì)胞置于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),。在培養(yǎng)過程中,,雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生并分泌單克隆抗體,收集培養(yǎng)上清液,,離心去除細(xì)胞及其碎片,,即可獲得所需要的單克隆抗體。但這種方法產(chǎn)生的抗體量有限,。各種新型培養(yǎng)技術(shù)和裝置不斷出現(xiàn),,極大提高了抗體的生產(chǎn)量。
抗體基本結(jié)構(gòu):經(jīng)x線晶體衍射結(jié)構(gòu)分析發(fā)現(xiàn),,Ig由四條多肽鏈組成,,各肽鏈之間由數(shù)量不等的鏈間二硫鍵連接。Ig可形成“Y”字型結(jié)構(gòu),稱為Ig單體,,是構(gòu)成抗體的基本單位,。天然Ig分子含有四條異源性多肽鏈,其中,,分子量較大的兩條鏈稱為重鏈(heavy chain,,H),而分子量較小的兩條鏈稱為輕鏈(Light chain,,L),。同一Ig分子中的兩條H鏈和兩條L鏈的氨基酸組成完全相同。重鏈分子量為50 000~75 000,,由450~550個(gè)氨基酸殘基組成,。重鏈恒定區(qū)的氨基酸組成和排列順序不同,其抗原性也不同,。多克隆抗體具有更普遍的抗原特異性,,可以同時(shí)識別多個(gè)不同的抗原分子。
IgE是什么,?與過敏有什么關(guān)系,?說IgE之前,我們先來了解一下抗體,,它的本質(zhì)是蛋白質(zhì),確切地說,,它是一種具有免疫功能的球蛋白,,存在于血清、體液,、外分泌液和一些細(xì)胞膜上,,因此也叫做免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig),。人體至少有5種免疫球蛋白,,各自具有不同的免疫學(xué)功能,包括IgM,,IgG,,IgA,IgD和IgE,。其中與過敏關(guān)系密切的是IgE抗體,。IgE是Ⅰ型超敏反應(yīng)機(jī)制中重要的免疫分子,自1967年IgE純化以來,,血清學(xué)檢測已成為診斷超敏反應(yīng)疾病常用的檢測方法,。多克隆抗體可以用于檢測特定蛋白質(zhì)在不同組織和細(xì)胞中的表達(dá)情況。兔抗富含脯氨酸蛋白11多克隆抗體基因
多克隆抗體的制備過程可以在實(shí)驗(yàn)室中完成,并且通常具有較高成功率,。北京自身抗體補(bǔ)給公司
人血清中的抗體多種多樣,,B淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生的抗體種類在108以上,可與眾多不同抗原發(fā)生特異性結(jié)合,??贵w多樣性的原因主要有兩方面:1.外源性因素環(huán)境中抗原種類甚多,每種大分子抗原又有多種抗原表位,,每種抗原表位均可選擇啟動(dòng)體內(nèi)一個(gè)B細(xì)胞克隆,,產(chǎn)生一種特異性抗體。2.內(nèi)源性因素抗體多樣性的另一個(gè)原因是由基因的結(jié)構(gòu)及功能特征所決定的,。編碼人Ig重鏈及κ,、λ型輕鏈的基因分別位于第14、2,、22號染色體上,。其中編碼Ig重鏈的基因包括編碼可變區(qū)的V、D,、J及編碼恒定區(qū)的C基因,;編碼Ig輕鏈的基因包括編碼可變區(qū)的V、J及編碼恒定區(qū)的C基因,。北京自身抗體補(bǔ)給公司