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例如,,磷酸特異性抗體可能只與活化的磷酸化蛋白發(fā)生反應(yīng),。如果您的蛋白定位在胞內(nèi),,則必須對細(xì)胞進(jìn)行裂解,。流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)可能要選擇識別細(xì)胞表面分子的抗體,。如果您的蛋白有三級結(jié)構(gòu),,且掩蓋了抗原表位,,則必須對樣本進(jìn)行變性,因?yàn)橛行┛贵w無法識別自然狀態(tài)的蛋白,。一些抗體只在冷凍或非固定組織中起效,,而有些抗體只對經(jīng)抗原修復(fù)后的石蠟切片起效。 目標(biāo)蛋白的物種來源 比較好選擇明確標(biāo)有目標(biāo)蛋白種屬的抗體,。參考抗體說明書或網(wǎng)站信息,。Merck抗體的報(bào)價(jià)具體是多少呢?長寧區(qū)Sigma抗體抗體銷售
在陰性對照(igG或mockIP)樣品中本底較高 抗體過量導(dǎo)致抗體與非靶蛋白結(jié)合∶ 與珠子的非特異性結(jié)合∶ 染色質(zhì)的不完金裂解∶ 試劑污染∶ "無DNA" PCR反應(yīng)顯示信號 DNA的較低回收率 ChIP抗體無效或較低親和力: ChIP抗體不足: 起始樣品不足: 細(xì)胞不完全溶解和無效裂解: 交聯(lián)過度: 交聯(lián)不足: 親和力較低或珠子質(zhì)量較差: PCR引物: 優(yōu)化抗體的濃度。 加入-個(gè)殘***步理,,以除這些非特異性蛋白或添加珠子的阻斷劑,。 優(yōu)化取解過程,,以民得介于200-100bp長度的染色質(zhì)。靜安區(qū)Abcam抗體抗體聯(lián)系人標(biāo)簽抗體的報(bào)價(jià)具體是多少呢?
信號弱 信號高 本底較高 準(zhǔn)確度較低(一偶然誤差) 計(jì)算的教據(jù)過高或過任《一系統(tǒng)誤差,,數(shù)據(jù)與"標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)"的偏差) 可能的原因: 實(shí)驗(yàn)試劑使用錯(cuò)誤實(shí)驗(yàn)試劑損壞 所用實(shí)驗(yàn)試劑稀釋度錯(cuò)誤儀器的過濾器選擇錯(cuò)誤(波長)前育時(shí)間過短,,溫度過低 試劑溫度不正確 在較高濃度時(shí),疊氮化鈉,、燕基乙身或DTT可能干擾過氧化物恃活性,。所用實(shí)驗(yàn)試劑稀釋度錯(cuò)誤醇育時(shí)間過長,溫度過高 洗洛不足洗得污染 試劑或小瓶/試管受到以前實(shí)驗(yàn)的污染 所用實(shí)驗(yàn)試劑(抗體和等結(jié)合物)稀釋度錯(cuò)誤
在解育過程中,,檢查密封蓋與平板的接觸情況,。確保樣品所用的稀釋倍數(shù)在數(shù)據(jù)計(jì)算范圍內(nèi)。認(rèn)真遵守產(chǎn)品說明書中的指示(第育時(shí)間,、稀釋等),。 確保樣品根據(jù)建議的樣品操作抽提、配制和貯藏(聚丙烯試管,,澄清樣品的貯戴溫度為-20℃),。 多因子免疫檢測法(Multiplex) 多因子檢測是在一次分析中分析多個(gè)靶標(biāo)蛋白的方法。它是生物標(biāo)記物篩選和蛋白分析的創(chuàng)新技術(shù),,它使研究人員能夠同時(shí)考察多重細(xì)胞間或細(xì)胞內(nèi)的總蛋白或磷酸化蛋白,,這些蛋白涉及細(xì)胞、組織或有機(jī)體的功能,。找Abcam抗體哪家靠譜,?
ChHPAb+trimethy-istione H3Lys917625)∶使用免gG 或AntrimethyHhistone H3Lys9抗體,與Magna ChIP 試劑盒17-610)一起將超聲處理后的NH3T3 L1組胞染色質(zhì)進(jìn)行染色質(zhì)免疫沉淀反應(yīng),。對獲取的trimethy-histone H3ILys9DNA精合片段進(jìn)行qPCR確認(rèn),,使用的引物為屋p16啟動(dòng)子附近序列。 染色質(zhì)免疫共沉淀∶相關(guān)產(chǎn)品 磁珠 專門應(yīng)用與ChIP實(shí)驗(yàn)的A,,G,或A/G蛋白Magna ChIP磁珠經(jīng)過嚴(yán)格優(yōu)化,,用于ChIP實(shí)驗(yàn)中收集沉淀復(fù)合物,,具有速度快,重復(fù)性好,,效率高的優(yōu)點(diǎn),。與常規(guī)瓊脂糖微珠不同,在反應(yīng)中,,Magna ChIP 磁珠可在磁場作用下快速移動(dòng)至反應(yīng)器邊緣,,***降低免疫沉淀復(fù)合物的滯留時(shí)間和機(jī)械壓力。上海買Sigma抗體哪家靠譜,?黃浦區(qū)Merck抗體抗體代理價(jià)格
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問題 可能的原因 處理方法 印跡上出現(xiàn)條紋 在凝膠的蛋白負(fù)荷過量,。 準(zhǔn)確測量蛋白濃度,,載入較少的蛋白。 印跡有污染或模糊 凝膠平衡不當(dāng),,或在實(shí)驗(yàn)過程中收縮 檢查凝膠平衡時(shí)間,。 采用麗春紅S染色時(shí), 轉(zhuǎn)膜無效 轉(zhuǎn)膜時(shí),,小心除去氣泡,。 印跡染色較差 確保在電轉(zhuǎn)過程中因?yàn)闇囟冗^高而產(chǎn)生氣泡或凝膠/膜變形 采用麗春紅S染色時(shí), 在轉(zhuǎn)膜過程中蛋白沒有轉(zhuǎn)移 檢查設(shè)備(轉(zhuǎn)膜盒,、盒蓋,、電源)。 印跡沒有染色 檢查在轉(zhuǎn)膜過程中凝膠和膜的順序是 確保膜位于凝膠的右側(cè),。 否正確長寧區(qū)Sigma抗體抗體銷售
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