紫外-可見分光光度計(jì)是基于紫外可見分光光度法原理,,利用物質(zhì)分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射吸收來進(jìn)行分析的一種分析儀器,。主要由光源、單色器,、吸收池,、檢測器和信號處理器等部件組成。其工作原理為分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見輻射光后,,發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜,。由于各種物質(zhì)具有各自不同的分子、原子和不同的分子空間結(jié)構(gòu),,其吸收光能量的情況也就不會相同,,因此,每種物質(zhì)就有其特有的,、固定的吸收光譜曲線,,可根據(jù)吸收光譜上的某些特征波長處的吸光度的高低判別或測定該物質(zhì)的含量,這就是分光光度定性和定量分析的基礎(chǔ),。本文介紹的是日立U-3010型號紫外分光光度計(jì)的使用方法,。日立U-3010型號紫外分光光度計(jì)的使用1.開電源,先開U-3010電源,,再啟動電腦2.點(diǎn)擊桌面上UV,,啟動程序3.點(diǎn)擊method窗口,將會出現(xiàn)GeneralQuantitationinstrumentMonitorReport五個對話框,,如下圖所示:4.設(shè)置(1)General對話框,;(2)Quantitation對話框,如果測波長選擇wavelength,,數(shù)量可選多個,,比如測定:260nm,280nm,,230nm,,則選擇3個,;如圖所示:(3)Instrument對話框,,將你要測定的波長值依次輸入框內(nèi),;(4)設(shè)置好后,點(diǎn)確定鍵5.放入空白對照,。光度計(jì)的應(yīng)用范圍十分廣闊,。福建可見分光光度計(jì)教程
在測量準(zhǔn)確性和精確度時,將空白濾光片和樣品濾光片放入插槽內(nèi),。將測得的輸出吸光度值與允許值范圍比較,。在檢查波長時,測定三個測試濾光片在對應(yīng)波長(260nm,、280nm和800nm)下的吸光度,,以確定每個波長的變異系數(shù)。許多分光光度計(jì),,都帶有一個特殊的功能——自檢,。建議用戶至少每周運(yùn)行一次自檢,但自動自檢的頻率可根據(jù)需要進(jìn)行設(shè)定,。自檢主要檢查儀器的幾個部分,。它通過測定現(xiàn)有波長的隨機(jī)誤差來校驗(yàn)檢測器,通過檢查大能量,、隨機(jī)誤差,、基準(zhǔn)傳感器的信號和光強(qiáng)度來校驗(yàn)光源。四川光度計(jì)使用光度計(jì)的制作方法難嗎,?上海元析告訴您,。
儀器使用頻繁,但甚少見到有人維護(hù),。其實(shí),,保持分光光度計(jì)清潔、無污染是成功操作的關(guān)鍵,。清潔儀器我們應(yīng)該用蘸有中性清潔劑的軟布擦拭分光光度計(jì)的表面,。刺激性的清潔劑可能會損壞儀器表面。你也可以清潔比色皿本身,。比色皿插槽只能用蘸有乙醇或異丙醇的無絨棉簽來清潔,。這可防止液體進(jìn)入內(nèi)部。如果你必須要用水清潔,,那么可用蘸有乙醇或異丙醇的棉簽來加速干燥,。比色皿插槽的蓋子也可以清潔,但不是泡在清潔劑中,。如有必要,,拆下蓋子,,用蘸有溫和清潔劑的軟布或無絨棉簽來清潔。此外,,平時不使用時,,應(yīng)蓋上比色皿插槽的蓋子,以免灰塵或其他污染物落入,。消毒和凈化如果分光光度計(jì)被微生物所污染,,那么可采用下列步驟進(jìn)行消毒和凈化。首先,,利用溫和的清潔劑來清潔設(shè)備,。然后,用蘸有消毒劑(通常是酒精溶液)的軟布擦拭表面,。如有必要,,拆下并清潔比色皿插槽。檢查組件維護(hù)的另一方面在于檢查分光光度計(jì)的光度準(zhǔn)確性,。Eppendorf提供了一個濾光片系統(tǒng)(BioSpectrometerreferencefilterkit),,以評估光度準(zhǔn)確性和系統(tǒng)的波長誤差。
一些儀器具有多種光源供選擇:紫外光,、可見光和甚至紅外光(780nm至3,000nm),。鎢燈和鹵素?zé)粢话阒桓采w可見光部分(大約380nm到800nm)。而氙燈則可以覆蓋紫外光和可見光區(qū)域,。分光光度計(jì)的帶寬很大程度上依賴于單色儀的狹縫的寬度,。可以投射出實(shí)驗(yàn)精確要求的光譜,。一種嚴(yán)格帶寬使得儀器能對復(fù)雜的混合物進(jìn)行高分辨率的吸光測量,。可變的單色儀的狹縫寬度能使一臺分光光度計(jì)滿足多種實(shí)驗(yàn)需要,。為了測量吸光值,,分光光度計(jì)制造商通常使用光電倍增管(photo-multipliertubes,PMTs)和光敏二極管,。上海光度計(jì)的特點(diǎn)分析,;
分光光度計(jì)的光譜也是需要考慮的一個重要因素。實(shí)驗(yàn)室研究人員希望省錢購入專門儀器定量核酸,、蛋白或者細(xì)菌的生長情況,。例如AmershamBiosciencesofPiscataway公司的GeneQuantII能在230、260,、280,、320、595和600nm的波長下測量樣品,。果果需要更大的靈活性,,研究者可以考慮一種更高性能的寬光譜儀器,,可以程序性地進(jìn)行ELISAs分析和比色分析。紫外分光光度計(jì)一般覆蓋190nm和380nm波長,,通常利用氘燈照明,。一些特殊的儀器可以提供滿足光子學(xué)和半導(dǎo)體研究需要的光譜范圍。光度計(jì)有哪些種類,?上海元析告訴您,。湖南分光光度計(jì)教程
上海元析的光度計(jì)是否結(jié)實(shí)耐用,?福建可見分光光度計(jì)教程
并發(fā)現(xiàn)吸收光譜相似的有機(jī)物質(zhì),,它們的結(jié)構(gòu)也相似。并且,,可以解釋用化學(xué)方法所不能說明的分子結(jié)構(gòu)問題,,初步建立了紫外可見分光光度計(jì)的理論基礎(chǔ),以此推動了紫外可見分光光度計(jì)的發(fā)展,。1918年美國國家標(biāo)準(zhǔn)局研制成了世界上diyi臺紫外可見分光光度計(jì)(不是商品儀器,,很不成熟)。此后,,紫外可見分光光度計(jì)很快在各個領(lǐng)域的分析工作中得到了應(yīng)用,。朗伯早在1760年就發(fā)現(xiàn)物質(zhì)對光的吸收與物質(zhì)的厚度成正比,后被人們稱之為朗伯定律;比耳在1852年又發(fā)現(xiàn)物質(zhì)對光的吸收與物質(zhì)濃度成正比,,后被人們稱之為比耳定律,。在應(yīng)用中,人們把朗伯定律和比耳定律聯(lián)合起來,,又稱之為朗伯-比耳定律,。隨后,人們開始重視研究物質(zhì)對光的吸收,,并試圖在物質(zhì)的定性,、定量分析方面予以使用。因此,,許多科學(xué)家開始研究以比耳定律為理論基礎(chǔ)的儀器裝置,。經(jīng)過一個漫長的時期后,美國Beckman公司于1945年,,推出世界上diyi臺成熟的紫外可見分光光度計(jì)商品儀器,。從此,紫外可見分光光度計(jì)的應(yīng)用開始得到飛速發(fā)展,。紫外可見分光光度計(jì)的展望紫外可見分光光度計(jì)雖然是一類有著很長歷史的分析儀器,,但每一次吸收了新的技術(shù)成果都使它煥發(fā)出新的活力。福建可見分光光度計(jì)教程
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